论文部分内容阅读
【目的】探讨雷公藤内酯醇(triptolide，T10)对缺氧诱导的视网膜新生血管形成中的作用。【方法】1、建立人脐静脉内皮细胞的缺氧培养模型，在上清液中加入T10，用MTT检测的方法，确定最佳T10抑制浓度。正常组细胞置于5%的二氧化碳恒温环境中，用RT-PCR和Western blot检测正常组、缺氧组及T10治疗组细胞内VEGF、ANXA2和t-PA的基因及蛋白表达水平。2、新生C57BL/6J小鼠96只随机分为正常组、缺氧组与T10治疗组，每组32只（64眼）。缺氧组与治疗组于生后5天（P5）置于75%氧浓度环境中，P12返回正常空气环境中，治疗组小鼠给予腹腔注射T10，正常组始终置于正常空气环境中。P17对正常组、缺氧组和治疗组行异硫氰酸荧光素灌注造影、视网膜铺片及病理切片，观察视网膜新生血管生成情况；病理切片每只眼选取5张切片，双盲法统计突破内界膜细胞核数；应用Real Time PCR分别检测三组VEGFmRNA、ANXA2mRNA和t-PAmRNA表达水平。【结果】1、T10的最佳抑制浓度为100nmol/L；治疗组与缺氧组相比，降低了人脐静脉细胞中VEGF、t-PA、PAI-1和ANXA2的基因和蛋白表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗组与正常组无统计学意义(P>0.05)。2、异硫氰酸荧光素灌注视网膜铺片造影正常组小鼠在P17视网膜血管分布均匀，无异常改变。缺氧组小鼠在P17可见视网膜血管明显迂曲、扩张，灌注区与无灌注区交界处发现大量的新生血管丛、微血管瘤及渗出。治疗组小鼠在P17未见视网膜大面积的无灌注区，渗漏及微动脉瘤。视网膜病理切片：对P17小鼠突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核进行计数统计，正常组见到很少突破视网膜内界膜的细胞核数为1.05±0.28/片/眼；缺氧组小鼠中可见大量突破视网膜内界膜的新生血管，细胞核数为81.95±1.93/片/眼，治疗组可见到少量突破视网膜内界膜的新生血管，细胞核数为42.25±1.16/片/眼，缺氧组和治疗组差别具有统计学意义(P<0.05)，治疗组和正常组无统计学意义(P>0.05)。3、对正常组、缺氧组和治疗组VEGFmRNA、ANXA2mRNA和t-PAmRNA相对表达水平进行统计学分析，治疗组与缺氧组表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)，治疗组与正常组的表达水平无统计学意义(P>0.05)。【结论】1、T10对人脐静脉内皮细胞的增殖有抑制作用，可以降低脐静脉内皮细胞中VEGF、ANXA2和t-PA的表达。2、缺氧诱导视网膜新生血管小鼠模型稳定、可靠、重复性高，可做为研究视网膜新生血管疾病发病机制和防治方法的动物模型。3、T10在视网膜新生血管形成中可以抑制VEGF、ANXA2和t-PA的表达。