1，25—二羟基维生素D3(1，25—dihydroxyvitaminD3，1，25—(OH)2D3)是维生素D的活性代谢产物。1，25—(OH)2D3除调节机体的钙磷代谢外，还调节多种细胞的增殖和分化。1，25—(OH)2D3的生物效应由维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)介导。VDR属于核受体超家族，免疫系统中的大多数细胞类型都表达VDR，尤其是抗原提呈细胞和T细胞。 1，25—(OH)2D3可以通过VDR调节这些细胞的表型、发育和功能，从而对免疫系统起有效调节作用。 天然产生的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)是有别于Th细胞的一个CD4+T细胞亚群，组成型表达IL-2受体α链(CD25)是其标志性特征。CD4+CD25+Treg细胞不仅能有效控制自身免疫反应，还是调节炎症、感染、过敏、移植排斥和肿瘤免疫的重要细胞群。Foxp3(Forhead box P3)是Forhead转录因子家族成员，是CD4+CD25+Treg细胞的特异性转录因子，也是调节其发育和功能的关键因子。 目前认为，CD4+CD25+Treg细胞是维持机体免疫系统外周耐受的一个重要调控者。1，25—(OH)2D3也可以在诱导免疫系统外周耐受中发挥重要作用。本实验主要观察1，25—(OH)2D3能否对大鼠外周血及脾脏的CD4+CD25+Treg产生影响，并通过E．Coli．LPS诱导大鼠Th1优势免疫应答，观察1，25—(OH)2D3能否保护大鼠抵抗致死剂量LPS的攻击，探讨这种保护作用是否与1，25—(OH)2D3对CD4+CD25+Treg细胞的调节作用有关。 第一部分 1，25—(OH)2D3对大鼠体重、血生化及CD4+CD25+Treg细胞的影响 目的：研究1，25—(OH)2D3对大鼠体重、血生化、外周血及脾脏CD4+CD25+Treg的影响。 方法：成年雄性Lewis大鼠，体重为250～280g，随机分成对照组和1，25—(OH)2D3组。1，25—(OH)2D3组又分为0.125 μ g组、0.25ug组和lug组共3个剂量组；灌胃给药，3次/周，共两周，对照组给予赋形剂。观察药物干预后大鼠体重变化，第15天抽取大鼠外周血检测血钙、血脂及肝、肾功能，流式细胞仪检测外周血及脾脏CD4+CD25+Treg数量，实时定量PCR检测脾脏Foxp3mRNA水平。 结果：大剂量的1，25—(OH)2D3(1ug)会轻度影响大鼠体重增长，并导致血钙升高；3个剂量组均轻度降低血脂水平，1，25—(OH)2D3对大鼠肝、肾功能未见明显影响。1，25—(OH)2D3使大鼠外周血及脾脏的CD4+CD25+Treg数量较对照组明显增加，也使大鼠脾脏Foxp3mRNA表达水平较对照组明显增加。 结论：1，25—(OH)2D3单独短期应用不影响机体肝、肾功能；对血钙及体重的影响可以通过调整使用剂量和方法来避免；1，25—(OH)2D3能够对大鼠外周血及脾脏CD4+CD25+Treg产生影响；1，25—(OH)2D3对CD4+CD25+Treg的调节作用可能通过直接或间接促进Foxp3mRNA的表达实现。 第二部分 1，25—(OH)2D3对致死剂量LPS攻击的保护作用研究 目的：研究1，25—(OH)2D3是否能保护大鼠抵抗致死剂量LPS攻击。 方法：成年雄性Lewis大鼠，体重为250～280g，随机分成对照组和1，25—(OH)2D3组。1，25—(OH)2D3组又分为0.125 μ g组、0.25ug组和1ug组3个剂量组：灌胃给药，3次/周，共两周，对照组给予赋形剂。第15天腹腔注射致死剂量LPS(10mg/Kg)，观察大鼠96小时内的死亡率；注射LPS 6小时后抽取大鼠外周血并留取脾脏标本；流式细胞仪检测外周血及脾脏CD4+CD25+Treg数量，实时定量PCR检测脾脏Foxp3mRNA水平，ELISA法检测外周血IL-10和TGF—β水平。 结果：用1，25+(OH)2D3处理的各组大鼠在注射LPS后96小时内的死亡率显著低于对照组。LPS攻击后6小时1，25—(OH)2D3预干预各组外周血及脾脏CD4+CD25+Treg数量，脾脏Foxp3mRNA表达水平明显高于对照组，外周血IL-10和TGF—β水平也显著高于对照组。 结论：1，25—(OH)2D3能够有效保护大鼠抵抗致死剂量LPS攻击；1，25—(OH)2D3对LPS攻击的保护作用可能与CD4+CD25+Treg细胞抑制Th1免疫反应有关。