目的:本实验拟构建PPARγK77过SUMO化病毒Ad-HA-PPARγ、Ad-Myc-SUMO1、Ad-Flag-PIAS1并将其转染至正常培养的人脐静脉内皮细胞中（HUVECs）,观察PPARγK77过SUMO是否能模拟高糖高脂（HG/HF）应激诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗并探讨其分子机制。方法:（1）将HUVEC以每孔2×10~4的密度接种在96孔板中。当生长至80%汇合时,HUVECs分别用2×10~9滴度浓度（缩写为2E+9PFU）,2E+8PFU,2E+7PFU和2E+6PFU转染不同时间,即24小时,36小时,48小时。在这个过程中,我们需要探索最佳浓度和处理时间。之后,首先以1:1:1的比例混合Ad-HA-PPARγ,Ad-Myc-SUMO1和Ad-Flag-PIAS1的病毒,并测量混合病毒的滴度。通过荧光显微镜下的荧光强度评估转染效力,并测量细胞的活力。蛋白表达由western blot进行检测（2）实验方案:实验分为4组,即正常对照（Ctrl）组,HG/HF组,空载体组和联合病毒转染（Over-SUMO）组。将细胞在10cm培养皿中均匀培养。当细胞生长至融合率80%时,Over-SUMO组和载体组中的细胞分别用Ad-HA-PPAR,Ad-Myc-SUMO1和Ad-Flag-PIAS1的混合病毒以及阴性对照转染。病毒的滴度为2E+7PFU,持续36h。此外,HG/HF组细胞用HG/HF（22m M葡萄糖和0.25m M PA）处理36h,既未转染也未用HG/HF处理的细胞被认为是对照组。采用免疫共沉淀（Co-IP）法和免疫印迹法检测PPARγ1的SUMO-1水平。用硝酸还原酶法及ELISA法检测NO和AngⅡ的水平。（3）荧光显微镜和流式荧光测定法用于测试活性氧（ROS）和线粒体膜电位的水平。同时,我们使用免疫共沉淀法（CO-IP）检测IKK和IKK-p S176,IKK和PIAS1之间的相互作用。最后,我们使用蛋白质印迹试验来检测PPARγ1的靶蛋白,包括PI3K,AKT,AKT-p S473和e NOS的表达量。结果:（1）2E+7PFU滴度转染36小时为最佳转染条件,Western blotting显示HA、Myc、Flag过表达,提示转染成功。（2）免疫共沉淀的数据进一步表明,HG/HF组和Over-SUMO组的SUMO1水平均高于正常对照组（Ctrl）或空载体组（Vehicle）,说明联合腺病毒转染产生的效应如HG/HF组一样,导致PPARγ过SUMO化。此外,与HG/HF组类似,联合腺病毒转染显着降低NO水平,而Ang II水平升高,与对照组（Ctrl）或空载体组（Vehicle）相比,表明PPARγ的过SUMO化可模拟HG/HF可诱导内皮细胞胰岛素抵抗。（3）与Ctrl组相比,HG/HF组和Over-SUMO组PI3K,AKT-p S473和e NOS的表达水平显着降低,但对照组和空载体组间差异无统计学意义。与载体组相比,Over-SUMO组PI3K,AKT-p S473和e NOS的表达水平也显着降低。结果表明,PPARγ的过SUMO化与HG/HF一样,均可通过抑制PI3K-AKT-e NOS途径诱导内皮IR。（4）与Ctrl组相比,HG/HF组和Over-SUMO组的ROS水平显着增加,但Ctrl和Vehicle组之间没有显着差异。PPARγ的过SUMO化与HG/HF组类似,显著增加ROS水平,表明PPARγ的过SUMO化可能导致细胞氧化应激。HG/HF组和Over-SUMO组的线粒体膜电位低于Ctrl组或Vehicle组（P<0.01）,但Ctrl和载体组间差异无统计学意义。结果表明PPARγ的过SUMO化与HG/HF相似,可导致线粒体膜电位崩溃,引起细胞损伤。（5）与HG/HF组类似,PPARγ的过SUMO化未能增加IKK表达水平,但显著提高了IKK-p S176水平,表明PPARγ的过SUMO化诱导IKK的活化。此外,共免疫共沉淀的结果表明,PPARγ的过SUMO化也促进了IKK和PIAS1之间的相互作用,这一结果也与HG/HF组相同。结论:PPARγ过SUMO化可模拟高糖高脂应激诱导产生的血管内皮细胞胰岛素抵抗。而且PPARγ过SUMO化以ROS-IKK-PIAS1-SUMO1环路形式易化由HG/HF诱导的内皮细胞胰岛素抵抗。