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红松(Pinus koraiensis Sieb.et Zucc),是主产于中国小兴安岭的珍贵树种。红松仁是一种营养价值很高的果品,富含蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、矿物质及其它生理活性物质,具有广阔的应用开发潜力。本文以红松松仁为原料,利用现代分离分析手段,对松仁蛋白的提取工艺、酶解条件优化,松仁多肽的分子量分布估测以及免疫活性进行了研究,主要结果如下:1、分别采用碱提酸沉法和超声波提取法提取松仁蛋白,最佳工艺条件依次为:碱浓度0.10mol/L,料液比1:14,50℃下提取时间90min;超声时间15min,超声功率为900W,料液比1:10。两种方法的松仁蛋白提取率分别为67.45%和97.65%。超声波提取法可以有效地提高松仁蛋白质的提取率,缩短反应周期。具有高效、节能的优点。2、选择Alcalase蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶作为松仁蛋白酶解制备松仁多肽的备用酶,对松仁蛋白进行酶解效果研究,根据其水解程度,确定Alcalase蛋白酶为松仁蛋白酶解的最佳用酶。在此酶作用下得到最优酶解条件为:酶解温度为50℃、pH值为8、酶解时间为150min、酶用量为5000U/g、底物浓度为8%。松仁蛋白酶解的水解度为30.06%。底物浓度对其酶解具有显著性影响,其次是酶用量。3、松仁多肽粗品(PNPC)经Sephadex G-25凝胶过滤层析分离纯化,得到了三个主要级分,分别为PNP1～2,PNP3和PNP4～7,选择几种低分子量标准蛋白,采用此方法测定其分子量分布,三个主要级分的分子量分布大致为:大于23105Da、3776Da左右、小于249Da。根据生物活性肽的定义,选取活性最高的PNP3组分研究,进行氨基酸种类与含量的分析,推测松仁多肽精品(PNPP,即PNP3)具有免疫调节作用。4、对PNPP的免疫调节作用进行验证性试验,实验结果显示各剂量组均能显著增加小鼠免疫器官的重量,对小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能和单核—巨噬细胞吞噬功能也均有促进作用,表明PNPP具有免疫调节作用。