腺病毒介导HBx转染正常人外周血淋巴细胞的研究

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目的:体外环境下,携带HBx的重组腺病毒转染正常人外周血淋巴细胞,探究人淋巴细胞内HBx的复制与扩增情况,及HBx对IL-10表达水平和人淋巴细胞凋亡的影响。方法:淋巴细胞取自正常人外周血,用携带HBx的重组腺病毒Ad-HBx转染淋巴细胞作为实验组。用携带有增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒Ad-EGFP转染淋巴细胞和未转染腺病毒的淋巴细胞作为本实验的阴性和空白对照组。3组分别标记为Ad-HBx/Lymphocyte组,Ad-EGFP/Lymphocyte组和Lymphocyte组。相同条件下,将3组细胞分别进行培养48h后,采用实时定量聚合酶链反应(Q-PCR)定量检测人外周血淋巴细胞内HBx基因的复制与扩增的情况。将3组细胞分别培养至12h,24h,36h,48h后用Elisa法检测IL-10的表达水平。采用Guava Nexin Reagent流式细胞术检测携带HBx的重组腺病毒转染人外周血淋巴细胞72h后对淋巴细胞凋亡效应的影响。结果:体外条件下,腺病毒介导HBx转染正常人外周血淋巴细胞,实验组中Ad-HBx转染48h后淋巴细胞内HBx基因的Q-PCR定量测定结果较Ad-EGFP/Lymphocyte组和Lymphocyte空白对照组明显增高,且此差异具有统计学意义(P<0.05)。Elisa法显示实验组中Ad-HBx转染24h,36h和48h后IL-10的表达水平明显低于Ad-EGFP/Lymphocyte组和Lymphocyte空白对照组,且此差异具有统计学意义(P<0.05)。Guava Nexin Reagent流式细胞术分别检测3组人淋巴细胞的凋亡情况,实验组Ad-HBx/Lymphocyte组早期凋亡细胞明显多于其余2组,且此差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:体外环境下,通过重组腺病毒转染至正常人外周血淋巴细胞中的HBx能够在细胞内实现基因的复制与扩增,能够对人淋巴细胞中IL-10的分泌产生明显的抑制作用,同时对人淋巴细胞早期凋亡效应具有明显的促进作用。HBx在人淋巴细胞内的扩增表达,对抗炎性因子的抑制作用及对淋巴细胞凋亡效应的促进作用,这可能是HBx实现对人免疫系统的相关调控作用的主要途径。
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