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细胞免疫治疗已经成为继手术、放疗、化疗后第四种恶性肿瘤的治疗方法。CD3+CD4-CD8-T (double negative T cells, DNT)细胞是一种新型的过继免疫治疗细胞。本课题研究的目的是探讨DNT细胞对PC-3荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及其体外扩增的实验研究。课题研究的主要方法：1、建立前列腺癌荷瘤小鼠模型：将SCID小鼠随机分成3组,皮下注射不同剂量PC-3细胞以建立荷瘤SCID小鼠人非激素依赖性前列腺癌皮下肿瘤模型。2、利用Rosettesep抗体吸附法和Easysep免疫磁珠法从正常人外周血分离、扩增、纯化DNT细胞,利用流式细胞仪鉴定其纯度。3、DNT细胞在PC-3荷瘤小鼠体内抑制肿瘤生长的作用：当皮下荷前列腺癌小鼠肿瘤生长至0.3cm×0.3cm大小时,随机分为3组,第1组给予DNT细胞尾静脉注射,第2组予PBS尾静脉注射,第3组给予CD8+T细胞尾静脉注射。监测SCID小鼠的体重、一般状态,每4天测量PC-3荷瘤小鼠肿瘤的体积。治疗28天,处死小鼠,剥除瘤组织,测量肿瘤重量并计算抑瘤率。我们的研究结果表明：皮下注射0.5×106个PC-3细胞即可成功建立人非激素依赖性前列腺癌系PC-3细胞荷瘤SCID小鼠模型；通过Rosettesep抗体吸附法和Easysep免疫磁珠法分离、扩增、纯化人外周血DNT细胞,采用流式细胞仪检测,DNT细胞纯度在98%以上；体外扩增的DNT细胞对荷人非激素依赖性前列腺癌SCID小鼠皮下移植瘤具有抑制肿瘤生长作用,肿瘤抑制率达42%,CD8+T细胞治疗组肿瘤抑制率为33%。通过课题研究我们得出如下结论：0.5×106个PC-3细胞可建立SCID小鼠皮下移植瘤模型；人外周血DNT细胞能够在体外进行分离及有效的扩增,纯化后可获得高纯度的DNT细胞；初步验证体外扩增后的DNT细胞能够抑制PC-3荷瘤动物模型中前列腺癌细胞的生长。我们的研究结果为进一步研究DNT细胞在恶性肿瘤免疫调节的功能机制及将来的临床应用提供了理论基础。