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背景和目的卵巢癌由于早期缺乏典型临床表现,具有病程短,易早期转移等特点,大部分卵巢癌被确诊时已是晚期,目前虽应用手术、化疗、放疗及生物治疗等综合治疗方法,5年生存率已有所提高,但其死亡率仍在妇科恶性肿瘤中最高。因此寻找有效的抑制卵巢癌发生发展的治疗靶点成为目前研究的热点,基因治疗在肿瘤领域的成功应用为卵巢癌的治疗提供了新的思路。即刻早期反应基因-1(immediate early response gene X-1,IEX-1)属即刻早期基因家族,定位于人染色体6p21.3,与主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)位点毗邻。近年研究表明,IEX-1在多种恶性肿瘤中表达异常,外源性IEX-1导入有调控肿瘤细胞生长和恶性转化的作用,提示IEX-1与肿瘤的发生发展可能存在着某种关系。最新研究表明,IEX-1在卵巢良性和交界性肿瘤组织内均有所表达,而卵巢癌组织中IEX-1表达强度减弱且阳性例数减少；且在卵巢上皮性肿瘤中IEX-1的表达和凋亡指数二者呈正相关,提示IEX-1的低表达与卵巢癌的恶性行为有关。本研究采用脂质体介导的基因转染技术,将重组质粒pEGFP-N1-IEX-1转染低表达IEX-1的人卵巢癌细胞SKOV3,观察IEX-1对卵巢癌细胞增殖、细胞周期以及顺铂敏感性的影响,进一步探讨其在卵巢癌发生发展中的作用,及其作为卵巢癌基因治疗靶点的意义,为临床治疗卵巢癌提供有价值的依据。方法1.提纯重组质粒pEGFP-N1-IEX-1, PCR鉴定质粒的正确性。采用脂质体介导将重组质粒pEGFP-N1-IEX-1和空质粒pEGFP-N1分别转染人卵巢癌细胞SKOV3;实验分三组：SKOV3组、SKOV3-EGFP组和SKOV3-IEX-1组。通过荧光倒置显微镜观察转染效率；采用RT-PCR及免疫细胞化学方法检测转染前后三组细胞中IEX-1mRNA和蛋白的表达情况。2.采用流式细胞仪观察转染前后卵巢癌细胞SKOV3细胞周期的变化,分析IEX-1对SKOV3细胞周期的影响。3.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后卵巢癌细胞SKOV3增殖情况以及对顺铂敏感性的变化。4.应用SPSS17.O软件进行统计学分析,计量资料多组间均数差异性比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)及bonferroni法检验。以双侧α=0.05为检验水准。结果1.PCR扩增重组质粒pEGFP-N1-IEX-1长度约412bp,证明插入序列正确。在SKOV3细胞中可见IEX-1mRNA和蛋白低表达,转染IEX-1后可检测到IEX-1mRNA和蛋白的高表达。2.重组质粒pEGFP-N1-IEX-1转染SKOV3细胞后,24h后荧光倒置显微镜下可见大量绿色荧光颗粒。3.流式细胞仪检测细胞周期结果显示：SKOV3-IEX-1组、SKOV3-EGFP组和SKOV3组细胞的细胞周期G0/G1期、S期、G2/M期的比例分别为：(62.93±1.27)%、(32.30±1.20)%、(4.41±0.97)%；(75.16±1.32)%、(17.98±1.05)、(6.82±0.27)%；(75.34±0.43)%、(16.89±0.29)%、(7.17±0.18)%；三组之间差异分别具有统计学意义。SKOV3-IEX-1组细胞与其他两组相比增殖期(S期+G2/M期)细胞比例显著增加,G0/G1期显著降低。4.MTT检测细胞增殖结果显示：转染重组质粒pEGFP-N1-IEX-1细胞的增殖速度较未转染细胞及转染空载体的细胞明显增快,差异有统计学意义(P<0.05)；而转染空载体组与正常细胞组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。5.转染pEGFP-N1-IEX-1的SKOV3细胞对顺铂的敏感性增强,与转染空载体的SKOV3细胞和未转染的SKOV3细胞相比,差异有显著性(P<0.05),而其余两组间比较则无显著性差异(P>0.05)。结论1.IEX-1可通过细胞周期中G1/S检验点起促进作用,从而增强卵巢癌细胞的体外增殖能力。2.IEX-1可增强卵巢癌细胞体外对顺铂的敏感性。3.在卵巢癌细胞系SKOV3中,通过调节细胞周期,过表达的IEX-1在细胞良好的生长条件下促进细胞增殖；而在细胞不良的生长条件下,促进细胞凋亡