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目的氧浓度变化诱导产生视网膜新生血管,以往认为促血管生成因子过度表达是血管新生的原因,但DNA损伤是否与视网膜新生血管有关,以往无此方向研究。本研究探讨参与DNA损伤修复的磷酸化蛋白γH2AX与小鼠视网膜新生血管的关系。方法1.动物实验将C57BL/6J小鼠分为四组:正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)空白对照组、OIR阳性干扰组、OIR阴性干扰组。采用视网膜铺片免疫荧光法对比观察氧诱导视网膜新生血管形态学变化。取四组中17日龄小鼠视网膜组织行视网膜铺片,免疫荧光法观察对比四组视网膜新生血管面积和无灌注区面积大小及γH2AX表达情况。2.细胞实验将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为四组:正常组、低氧模型空白对照组、低氧模型阳性干扰组、低氧模型阴性干扰组。细胞处理后12小时收样,应用免疫荧光法比较HUVEC不同组间γH2AX的表达情况,应用免疫印迹法定量检测HUVEC不同组间γH2AX的表达。结果1.动物实验部分视网膜铺片免疫荧光结果显示,OIR模型建立成功。四组17日龄小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积比较,总体差异均有统计学意义(F=437.623、93.047,均有P<0.01),两两比较,OIR空白对照组、OIR模型阴性干扰组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较正常组明显增大(LSD-t检验:P<0.01),OIR模型阳性干扰组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较OIR空白对照组和OIR模型阴性干扰组明显减小(LSD-t检验:P<0.01)。17日龄小鼠视网膜γH2AX焦点团聚集出现情况与新生血管和无灌注区面积大小变化趋势相一致。2.细胞实验部分四组HUVEC的免疫荧光染色γH2AX焦点阳性细胞百分数,总体差异有统计学意义(F=64.970,P<0.01)。进一步两两比较,低氧模型空白对照组、低氧模型阴性干扰组γH2AX焦点阳性细胞百分数较正常组明显增大(LSD-t检验:P<0.01),低氧模型阳性干扰组较低氧模型空白对照组和低氧模型阴性干扰组明显减小(LSD-t检验:P<0.01)。免疫印迹法定量检测HUVEC不同组间γH2AX的表达量与免疫荧光趋势相一致。免疫印迹法在蛋白水平的定量检测结果与动物实验免疫荧光趋势相一致。结论缺氧环境下,γH2AX在小鼠视网膜血管和体外培养的HUVEC中均大量表达。γH2AX的表达与视网膜血管新生有关。低氧诱导的DNA损伤修复反应可能与视网膜血管新生有一定关系。