论文部分内容阅读
第一部分褪黑素受体基因与多囊卵巢综合征相关性的家系遗传研究研究背景：多囊卵巢综合征(PCOS)是一种涉及全身多器官的复杂的神经-生殖内分泌、代谢异常性疾病。目前多数学者认为,PCOS的主要病理生理机制之一是胰岛素抵抗(IR)和高胰岛素血症,由此带来一系列的代谢紊乱综合征,甚至可能导致远期并发症。这与2型糖尿病的病理生理发病机制相似。褪黑素受体基因(melatonin receptor, MTNR)是研究较多的2型糖尿病的新型候选基因。有研究证实rs10830963与PCOS患者的胰岛素分泌、糖耐量和睾酮浓度有关,但与PCOS发病不相关。我们前期的病例-对照研究发现,MTNR1A的rs2119882位点和MTNR1B的rs10830963位点均与PCOS的发病易感性有关。研究结果的不一致可能受到病例-对照研究设计的限制,也会受到不同种族及环境等因素影响而引起人群分层所致。传递不平衡检验方法(transmission disequilibrium test,TDT)主要研究对象是先证者的核心家系,是一种以家庭成员做为内对照的研究方法。近年为广大研究者普遍采用,成为用来研究多基因复杂疾病的主要方法。这种以核心家系为背景以双亲为内对照的研究方法,能保证研究组和对照组在遗传及生活环境等方面的一致性,基本消除传统的病例-对照研究的人群分层、环境因素或是遗传异质性的影响。研究目的：本研究采用基于核心家系的TDT研究方法,研究MTNR1A的rs2119882位点和MTNR1B的rs10830963位点多态性与中国汉族人群的PCOS发病是否存在相关性。研究方法：选择2007年7月-2014年4月在山东大学附属生殖医院就诊的中国汉族263个PCOS患者为先证者,采用由其父亲、母亲以及患者组成的三口之家(总共789名参与者)作为研究对象,对所有研究对象,测量体重、身高、腰围、腹围、血压(收缩压和舒张压),计算出体重指数。晨起空腹抽血,DNA提取用于基因测序,并检测血脂(包括总胆固醇和血清甘油三酯)、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、空腹胰岛素、空腹血糖,并计算出HOMA-IR, PCOS患者还要检测卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、垂体泌乳素、睾酮、餐后2小时血糖、餐后2小时胰岛素、硫酸脱氢表雄酮、抑制素B、性激素结合球蛋白、促甲状腺激素等。将PCOS患者按照体重指数(以25为界)分为肥胖组A组(体重指数≥25Kg/m2)和非肥胖组B组(体重指数<25Kg/m2),患者父母据此相应分为C组和D组,E组和F组。采用直接测序法检测rs2119882和rs10830963多态性,进行家系间的TDT分析,研究MTNR的核苷酸多态性与PCOS的相关性。结果：rs2119882和rs10830963基因型分布都符合哈迪-温伯格平衡。进行TDT检验后,发现MTNR1A的rs2119882位点存在C等位基因在PCOS患者中的过度传递现象,有统计学差异(transmitted/non-transmitted=90:45;X2=5.33,P=0.0209)。C等位基因在PCOS患者肥胖组和非肥胖组之间有显著的统计学意义(#=5.5983,P=0.018)。而MTNR1B的rs1 0830963位点经TDT分析未检测到显著的传递不平衡现象(transmitted/non-transmitted=76:51;X2=2.0, P=0.1573)。我们还发现肥胖组PCOS患者的临床代谢指标高于非肥胖组：空腹胰岛素(]nIU/1)(19.14+9.77,10.16±5.15,P<0.05)； 服糖后2小时胰岛素(mIU/1)(100.02+71.10,50.81+51.79,P<0.05)；甘油三酉(2.92+3.13,1.85+1-64,P<0.05)。父亲组的空腹胰岛素(mmol/1)(1.88±1.35,1.03±0.52, P<0.05); HOMA-IR(10.09+6.52,5.08-2.18,P<0.05),(mIU/1)母亲组HOMA-IR (0.95±1.82,0.39±0.68, P<0.05).。肥胖组患者及其父母的HOMA-IR (0.96±1.69,0.54±0.99, P<0.05)均有显著性差异(P<0.05)HOMA-IR结论：基因的rs10830963位点多态性与MTNR1B的发病易感性无明显相PCOS关。而基因rs2119882位点的核苷酸多态性与MTNR1A的发病易感性有PCOS关,C等位基因可能作为关键等位基因增加了的发病风险。PCOS第二部分纤溶酶原激活抑制因子-1基因4G/5G多态性与多囊卵巢综合征相关性的家系研究研究背景：PCOS主要的病理生理机制之一是胰岛素抵抗,大量研究表明血浆纤溶酶原激活物抑制物因子1 (plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)基因启动子-675区4G/5G多态性可以通过升高血浆PAI-1水平及活性影响胰岛素敏感性,导致胰岛素抵抗。关于PAI-1启动子-675区4G/5G多态性与PCOS的关系,多家研究结论不尽一致。为了进一步明确PAI-1启动子-675区4G/5G多态性与PCOS发病的关系,我们采用传递不平衡检验方法(transmission disequilibrium test, TDT)对PCOS的核心家系进行分析。这种以核心家系为背景的研究保证了所有研究对象在遗传背景等方面的一致性,消除了传统的病例-对照的遗传与环境因素差异而导致的假阳性关联的结果。研究目的：本研究采用基于核心家系的TDT研究方法,将所选我国汉族的PCOS核心家系内的成员作为内对照,研究PAI-1启动子-675区4G/5G多态性与PCOS发病是否存在相关性。研究方法：选择285个来自山东地区的汉族人三口之家(总共855名参与者)的家.庭成员作为研究对象,进行家系间的TDT分析研究。PCOS诊断标准按照2003年鹿特丹欧洲生殖年会修订的标准执行。对所有研究对象,测量身高、体重、腰围、腹围、收缩压、舒张压,计算出体重指数。晨起空腹抽血,DNA提取后进行基因测序法,并检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、空腹血糖、空腹胰岛素,计算出HOMA-IR, PCOS患者还要检测卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、垂体泌乳素、睾酮、餐后2小时血糖、餐后2小时胰岛素、硫酸脱氢表雄酮、抑制素B、性激素结合球蛋白、促甲状腺激素等。将PCOS患者按照体重指数(以25为界)分为肥胖组A组(体重指数≥25Kg/m2)和非肥胖组B组(体重指数<25Kg/m2),患者父母据此相应分为C组和D组,E组和F组。采用PCR和直接测序法分析PAI-1启动子-675区4G/5G多态性与PCOS的相关性。结果：通过TDT检验发现,虽然PAI-1基因5G基因型在家系呈现过度传递,但是没有明显的统计学意义。我们还发现肥胖组的空腹胰岛素、HOMA-IR及甘油三酯均较非肥胖组明显升高：患者组空腹胰岛素(mIU/1) (18.91±9.80,10.24±5.11, P<0.05), HOMA-IR(4.88±2.77,2.54±1.42, P<0.05), TG(mmol/1) (1.86 ±1.31,1.03+0.55,P<0.05)；父亲组空腹胰岛素(mIU/1) (9.99±6.46,5.05±2.20, P<0.05), HOMA-IR(3.20±2.49,1.30±0.61, P<0.05), TG(mmol/1) (1.83±1.24,1.38±1.07,P<0.05)；母亲组空腹胰岛素(mIU/1) (11.79±5.76,7.10±3.50,P<0.05), HOMA-IR (2.94±1.66,1.86±0.96, P<0.05), TG(mmol/1)(1.76±1.30,1.28±0.93, P<0.05).而三组的空腹血糖均无统计学意义(P>0.05)。结论：本研究结果不支持PAI-1基因启动子区4G/5G多态性与PCOS发病易感性有关,提示PAI-1基因可能不是PCOS的患病候选基因。