近年来,肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）已发展为国内外最常见的癌症之一,肝癌发病率在各种癌症中排名第四,位居世界前列。目前,肝切除术、靶向放化疗等肝癌治疗手段发展较快,但肝癌患者的5年生存率仍然较低,并且其预后较差。因此寻找更加安全有效、提升患者生存质量的治疗肝癌的方法有着重要的意义。肝癌细胞的酸性微环境与肝癌的高转移性密切相关。癌症根据是否能被影像手段检测到可分为实体瘤和非实体瘤,而肝癌作为其中一种实体瘤,由于其迅速增殖可导致耗氧量增加。在氧气不足的情况下,细胞通过糖酵解的代谢方式产生L-乳酸和游离H+,于是就形成了p H6.5～p H6.9局部的弱酸性环境,而正常组织的p H为7.3～7.4的范围内。因此肝癌细胞微环境的酸碱性可能会影响肝癌的发生发展进程,为癌细胞的侵袭和转移提供条件。酸敏感离子通道（acid sensing ion channels,ASICs）是一类可由胞膜外H+瞬时激活的阳离子门控通道。作为上皮钠离子通道/退变素家族的一员,其在哺乳动物的肺组织、神经系统、骨细胞等均有大量表达。同时多项研究发现,ASICs广泛参与多种疾病的发展过程,如肿瘤、血栓栓塞引起的脑部缺血、癫痫和炎症等,这些疾病的共同特征之一就是局部组织酸化。大量研究已报道,ASICs具有多种亚型,包括ASIC1、ASIC2、ASIC3和ASIC4。酸敏感离子通道1a（acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a）是ASIC1的其中一个亚型,Na+、Ca2+等离子可经由ASIC1a内流从胞外进入胞内,从而影响到细胞内一系列的变化。自噬是细胞对胞质细胞器、蛋白质和大分子的降解从而实现降解产物的循环利用,是一种高度保守的真核细胞循环过程,对细胞的存活和维持起着重要的作用,这一过程的功能障碍导致了许多人类疾病的病理。在一些应激条件下,自噬可被诱导,如内质网应激、饥饿、缺氧及酸化等,但是自噬的过度激活可导致细胞的死亡。肿瘤细胞和自噬之间的关系十分复杂,在肿瘤发生发展的不同阶段,自噬可能起到促进或抑制肿瘤发生发展的双重作用。在不同情况下,细胞自噬不仅可以成为治疗肿瘤的靶点,成为攻克肿瘤的方向,也可帮助癌细胞避免凋亡,成为癌症恶化发展的机制之一。本研究基于课题组前期多年研究肝脏、ASIC1a及自噬的基础上,通过在酸性环境下培养肝癌细胞Hep G2,研究肿瘤酸性微环境下ASIC1a对Hep G2细胞侵袭和转移的影响,探究自噬是否参与其中及在肝癌发病过程中的作用。这有助于明确肝癌在酸性微环境下的发病特点,进一步完善相关发病机制研究,为肝癌的预防和治疗提供新的思路。本课题首先采用蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）观察Hep G2细胞在p H7.4和p H6.5的酸性微环境下ASIC1a蛋白的表达。体外使用ASIC1a特异性阻断剂Psalmotoxin-1（PcTx-1）,阻断ASIC1a蛋白表达与mRNA的转录,采用Transwell小室侵袭实验和划痕愈合实验观察ASIC1a对肝癌细胞侵袭和迁移的影响;采用e GFP-m Cherry-LC3双荧光质粒转染观察ASIC1a对自噬通量的影响;并检测使用自噬抑制剂3-MA抑制自噬的表达,观察自噬对肝癌细胞侵袭和转移的影响,最后通过透射电镜验证酸性环境下阻断ASIC1a对肝癌细胞中自噬小泡的亚微结构的影响;使用激光共聚焦观察肝癌细胞在瞬时酸刺激的条件下,胞内钙离子的瞬时变化。研究结果发现,在酸性微环境中,WB和qRT-PCR实验结果表明,肝癌细胞中ASIC1a和自噬相关蛋白Beclin1,LC3II/I的表达显著上调,p62表达下调;Transwell小室侵袭实验和细胞划痕实验结果证明,阻断ASIC1a可显著抑制肝癌细胞在酸性微环境中的迁移和侵袭;抑制自噬减少肝癌细胞在酸性微环境中的迁移和侵袭;阻断或沉默ASIC1a可显著抑制酸性微环境刺激的肝癌细胞自噬;ASIC1a可通过诱导自噬促进酸性微环境诱导的Hep G2细胞迁移和侵袭,这可能与Ca2+内流有关。综上所述,ASIC1a可诱导自噬促进酸性微环境刺激的肝癌细胞迁移和侵袭,抑制ASIC1a和自噬水平可显著延缓肝癌细胞迁移和侵袭的进程,且ASIC1a加速肝癌细胞侵袭和转移的作用可能与Ca2+内流有潜在联系。