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研究目的:抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)的主要病理基础是血液的高凝状态和大量抗β2GPI抗体(β-2 glycoprotein I antibody,β2GPI-Ab)的存在。β2糖蛋白I(β-2 glycoprotein I,β2GPⅠ)是抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody,a PL)的关键靶抗原,能够与氧化低密度脂蛋白特异性结合。动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)主要影响身体中的大中动脉,粥样斑块中有着复杂的病理改变,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)在其中发挥重要作用。a PL促进内皮细胞的炎症和促凝血作用,导致细胞功能紊乱和炎症反应,提示APS与As的相关性。近年来,研究发现VSMC的表型能够发生“巨噬样”改变,并吞噬大量的脂质,形成“泡沫细胞”,参与血管内膜下脂质斑块的形成。课题组前期研究发现Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物介导大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A7r5)泡沫化过程中发挥重要作用,而其中的具体机制尚未阐明。本文首先探讨TLR4在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5向“巨噬样”细胞表型转化过程中的作用,然后进一步探讨TLR4-cJun氨基末端激酶1/2(c-Jun N-terminal kinases 1/2,JNK1/2)信号通路在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物影响A7r5脂质转运相关分子表达中的作用。研究方法:(1)实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)和免疫荧光(immunofluorescence,IF)分别检测oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/β2GPⅠ-Ab复合物、β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物和oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab抗体复合物刺激后A7r5细胞中平滑肌细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、巨噬细胞表面标志物CD68和半乳糖凝集素3(LGALS3)mRNA和蛋白的表达。用TLR4特异性抑制剂TAK-242预处理细胞,观察TLR4是否参与上述过程。(2)Western blot检测oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/β2GPⅠ-Ab复合物、β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物和oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物处理后,A7r5细胞t-JNK1/2和p-JNK1/2(Thr183/Tyr185)的蛋白表达水平。(3)RT-q PCR和Western blot分别检测oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/β2GPⅠ-Ab复合物、β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物和oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物处理后,A7r5细胞CD36、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和ATP结合盒转运蛋白G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的mRNA和蛋白表达。用TLR4抑制剂TAK-242和JNK1/2抑制剂SP600125预处理细胞,观察TLR4和JNK1/2是否参与上述过程。研究结果:(1)oxLDL(30μg/m L)/β2GPⅠ(100μg/m L)/β2GPⅠ-Ab(100μg/m L)复合物能够明显促使A7r5细胞表达巨噬细胞分子标志CD68和LGALS3,同时降低细胞骨架蛋白α-SMA的表达。TAK-242(5μM)能明显抑制复合物诱导的细胞表型改变。(2)oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物可以增加血管平滑肌细胞JNK1/2的磷酸化水平。同时,它可以显著增加A7r5细胞表面CD36 mRNA和蛋白的表达,抑制细胞ABCA1和ABCG1mRNA与蛋白的表达。(3)使用TAK-242(5μM)或SP600125(90 n M)预处理细胞后,oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导CD36表达升高和ABCA1、ABCG1表达降低的现象被逆转。结论:(1)oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5细胞从收缩型向“巨噬样”细胞发生转化,使用TLR4抑制剂TAK-242能够逆转这一现象。(2)oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5细胞JNK1/2的磷酸化水平升高,同时促进细胞CD36的表达,并抑制ABCA1和ABCG1的表达。(3)使用TAK-242或SP600125对A7r5细胞进行预处理后,oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导CD36表达升高及抑制ABCA1和ABCG1表达的现象被逆转。