疣状毛癣菌感染豚鼠模型的构建

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目的:本实验选用健康豚鼠作为研究对象,比较通过不同机械损伤处理豚鼠体表后,疣状毛癣菌致豚鼠局部皮肤感染皮肤癣菌病的模型构建。  方法:实验菌株疣状毛癣菌及阳性对照菌株须癣毛癣菌均由北京大学真菌与真菌病研究中心提供。实验动物分4组,第1组豚鼠未给任何处置直接涂抹疣状毛癣菌菌悬液100μL;第2、4组豚鼠采用刮毛和摩擦方式预处理背部皮肤后分别涂抹疣状毛癣菌和须癣毛癣菌菌悬液100μL;第3组豚鼠只予刮毛处理后涂抹疣状毛癣菌菌悬液100μL。采用直接镜检、真菌培养和组织病理方法验证感染结果。将第2、3组真菌培养获得的阳性菌落转接种于溴甲酚紫乳固体酵母提取琼脂(BCP-MSY)培养基上,观察是否有水解晕形成;将初步鉴定为疣状毛癣菌的菌落进行铜圈法小培养,采用毛癣菌营养琼脂3号培养基(T3),置于28℃和37℃培养2周,光镜下观察菌落形态特征。  结果:以皮肤出现肉眼可见症状、真菌镜检和真菌培养阳性为造模成功标准。  皮损观察第1组豚鼠毛发外观正常,未见红斑、鳞屑;第2组豚鼠背部于接种后第2~3天出现红斑、脱屑,摩擦处见血痂,上覆白色糠状鳞屑,原刮毛区见毛发不规则生长,长短不一,极易拔出,血痂于第10~11天开始脱落;第3组豚鼠背部皮肤于接种后第4~5天出现红斑、脱屑,程度较轻;第4组豚鼠背部皮肤改变与第2组基本相同,唯其程度较前者稍重。观察至第3周处死动物,2、3、4组豚鼠背部皮损均持续存在,无消褪迹象,各观察组间未见明显差异。  直接镜检第1组动物直接镜检持续阴性。第2~4组所有动物背部鳞屑于接种后第7-9天开始出现镜检阳性,至第10天镜检均阳性;持续至第3周动物处死时,毛发、鳞屑直接镜检均可见不规则菌丝、孢子。  真菌培养将各组实验动物鳞屑、毛发接种于SDA平板。7天后第2、3组开始有真菌菌落生长,第4组于接种后第5天开始可见真菌菌落生长,2周后各平板接种点均有菌落生长,且与接种前菌落形态基本相同。第1组动物真菌培养2周持续阴性。  组织病理 HE染色第2、3、4组表皮角质层和部分毛囊漏斗部可见折光性强的菌丝及孢子,真皮浅层可见混合性炎性细胞浸润。PAS染色显示菌丝及孢子分布形式与HE染色相似,PAS阳性染色呈紫红色。第1组:组织切片中未见真菌菌丝或孢子。  实验分离菌株的初步鉴定挑取第2、3组培养获得的菌落转接种于溴甲酚紫乳固体酵母提取琼脂(BCP-MSY)培养基上,最早于48小时后即可见水解晕形成。  小培养(铜圈法)菌落在毛癣菌营养琼脂3号培养基(T3)培养基上生长较好,约1周后,小培养显示:有大量菌丝、梨形或棒状小分生孢子生长和链状厚膜孢子。培养约二周时,可见鼠尾状大分生孢子产生。偶可见棒状大分生孢子。  结论:1、机械性破坏体豚鼠体表皮肤完整性可建立稳定的疣状毛癣菌感染豚鼠的动物模型。2、疣状毛癣菌在溴甲酚紫乳固体酵母提取琼脂(BCP-MSY)培养基上培养48小时后即可见明显水解晕形成,此特征有助于早期鉴别该菌。
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