HSF2BP在小鼠精子发生中作用机理的研究

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哺乳动物的精子发生过程高度有序,每一环节都有许多调节因子的参与。热休克因子HSF2和锌指类型转录因子BNC1在精子发生中均很重要,缺失导致小鼠生殖力下降。HSF2BP能够分别与HSF2和BNC1相互作用,在精子发生中可能扮演着重要的角色,但是关于HSF2BP在精子发生中的功能鲜有报道。  为了明确HSF2BP在睾丸各种类型生殖细胞中的表达,本研究首先通过生殖细胞密度梯度分离得到各种细胞,经过实时定量PCR后发现HSF2BP在有丝分裂阶段表达量较低,细线前期精母细胞表达量上升,粗线期精母细胞表达量达到最高,到圆形精子细胞阶段,表达量又有所下降。直至成熟精子时,HSF2BP的表达含量急剧降低。HSF2BP在精子发生中的表达量起伏变化,说明了HSF2BP在精子发生中行使了某种功能。接着,为了进一步研究HSF2BP在精子发生中的功能,我们通过CRISPR/Cas9技术构建了Hsf2bp敲除小鼠,发现雄性小鼠不育。HE染色发现曲细精管中没有成熟精子。证明了HSF2BP在精子发生过程十分重要。  此外,为了尝试体外修复Hsf2bp突变的精原干细胞,我们首先分离出敲除小鼠的精原干细胞进行体外培养,然后利用CRISPR/Cas9技术将gRNA和Cas9mRNA的质粒与单链寡核苷酸一同转染精原干细胞,但是没有得到修复后的干细胞,在测得的7个单克隆细胞系中,仅有两个单克隆目的序列再次敲除。  以上结果表明,HSF2BP在精子发生过程中不可或缺,HSF2BP敲除后对精原干细胞的增殖和存活无明显影响。
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