论文部分内容阅读
目的:研究Ⅱ型半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin F对中枢神经系统脱髓鞘疾病的影响及其作用机制。方法:利用C57B6/129 cystatin F基因敲除小鼠及其野生型同窝仔通过0.2% cuprizone饲育建立中枢神经系统髓鞘脱失模型,正常C57B6小鼠作为空白对照。采用蛋白脂蛋白(PLP)免疫组化和Black Gold髓鞘染色方法,通过髓鞘残留面积比对基因敲除小鼠胼胝体内髓鞘脱失情况与野生型同窝仔小鼠进行对比研究。通过免疫组化和原位杂交方法分别对cuprizone饲育4周和2周后模型胼胝体内小胶质细胞/巨噬细胞系细胞的集聚及cystatin F抑制的目标酶cathepsin C的表达情况进行分析,借以了解cystatin F影响髓鞘脱失的机制。结果:1.通过髓鞘残留面积比的分析发现cuprizone饲育4周后,基因敲除小鼠和野生型同窝仔的髓鞘残留面积比均显著低于空白对照小鼠;基因敲除小鼠髓鞘脱失情况显著高于野生型同窝仔。2.cuprizone饲育4周后,基因敲除小鼠胼胝体内小胶质细胞/巨噬细胞系细胞数量显著高于野生型同窝仔;同时cathepsin C的表达也显著高于野生型同窝仔。3.cuprizone饲育2周后,基因敲除小鼠和野生型同窝仔的髓鞘残留面积比虽低于空白对照小鼠,但无显著性差异。4.cuprizone饲育2周后,基因敲除小鼠与其野生型同窝仔相比胼胝体内小胶质细胞/巨噬细胞系细胞数量和cathepsin C的表达均无显著性差异。结论:1.cystatin F基因敲除加重cuprizone诱导的髓鞘脱失。2.由cathepsin C高表达所导致的小胶质细胞/巨噬细胞系细胞集聚是cystatin F基因缺乏导致脱髓程度加重的可能原因。3.cystatin F基因敲除不影响少突胶质细胞对cuprizone毒性的敏感性。4.cystatin F基因缺乏并不直接影响cathepsin C表达。