【摘 要】
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目的:探究靶向TGF-β1-SP1信号通路调控豚鼠巩膜成纤维细胞合成与分泌胶原蛋白。方法:分离培养豚鼠巩膜成纤维细胞,分4组给药干预后,通过免疫组化染色、RT-PCR及Western blot
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目的:探究靶向TGF-β1-SP1信号通路调控豚鼠巩膜成纤维细胞合成与分泌胶原蛋白。方法:分离培养豚鼠巩膜成纤维细胞,分4组给药干预后,通过免疫组化染色、RT-PCR及Western blot法检测Sp1与Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达。结果:(1)成功分离培养豚鼠巩膜成纤维细胞,表现为梭形且透明,细胞扁平且饱满,呈不规则栅栏状排列。经三代增殖后,形态稳定;(2)巩膜成纤维细胞胞浆中可见众多波形蛋白;(3)所有小组的细胞中,均表达Sp1与Ⅰ型胶原蛋白;(4)TGF-β1组中细胞核内Ⅰ型胶原显色强于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGFβ1+TGFβ1抑制剂组中弱于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+Sp1抑制剂组中比TGF-β1+TGF-β1抑制剂组强但比对照组弱,差异具有统计学意义(P<0.05);(5)TGF-β1组中细胞核内Sp1蛋白显色程度显著优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+TGF-β1抑制剂组中的Sp1蛋白显色程度同对照组相比相对较差,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+Sp1抑制剂组中比TGF-β1+TGF-β1抑制剂组强,但同对照组相比相对较弱,差异具有统计学意义(P<0.05);(6)在巩膜成纤维细胞中,可检测Sp1、Ⅰ型胶原的mRNA表达;(7)TGF-β1组中Sp1蛋白mRNA表达量强于对照组,差异具有统计学意义P<0.05);TGF-β1+TGF-β1抑制剂组中弱于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+Sp1抑制剂组中比TGF-β1+TGF-β1抑制剂组强但比对照组弱,差异具有统计学意义(P<0.05);(8)TGF-β1组细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达量强于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGFβ1+TGFβ1抑制剂组中弱于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+Sp1抑制剂组中比TGF-β1+TGF-β1抑制剂组强但比对照组弱,差异具有统计学意义(P<0.05);(9)在巩膜成纤维细胞中,出现了Sp1、Ⅰ型胶原的蛋白阳性;(10)TGF-β1组中Sp1和Ⅰ型胶原的蛋白表达量强于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+TGF-β1抑制剂组中弱于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+Sp1抑制剂组中比TGF-β1+TGF-β1抑制剂组强但比对照组弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1与Sp1蛋白与Ⅰ型胶原蛋白的表达密切相关,从而认为TGFβ1可以通过Sp1信号传导通路调控Ⅰ型胶原合成与降解。
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