鹅SCD1基因的遗传变异及其组织表达规律的研究

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硬脂酰辅酶A去饱和酶(Stearoyl-CoA desaturase, SCD)1是合成单不饱和脂肪酸的限速酶,它主要催化饱和脂肪酸——硬脂酰辅酶A(C16:0)和棕榈酰辅酶A(C18:0)在第9和10碳原子间导入氢键,分别形成单不饱和脂肪酸——油酸(C16:1)和棕榈酸(C18:1)。本研究以原鸡SCD1基因序列为基础,设计引物扩增并克隆朗德鹅SCD1基因CDS序列;以扩增得到的朗德鹅SCD1基因的CDS序列为模板,设计多对覆盖全CDS序列的引物,对朗德鹅、狮头鹅、四川白鹅和豁眼鹅进行SNP分析;运用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,研究SCD1基因在朗德鹅各组织中的表达状况、对照组和填肥组之间的表达水平差异、不同填饲阶段的组织表达规律,以及禁食对其表达的影响。主要结果如下:1、克隆了朗德鹅SCD1基因的完整CDS序列,全长1083bp,包含6个外显子,编码360个氨基酸。预测其蛋白质分子量为40967.2Da,等电点为8.8,为亲水性蛋白,存在4个跨膜区域。预测其氨基酸二级结构存在Alpha螺旋、延长片段和无规卷曲三种结构。与人、小鼠、牛、原鸡和斑胸草雀的同源性为72%-92%。2、采用PCR-SSCP技术检测SCD1基因的多态性,在狮头鹅、四川白鹅和豁眼鹅的外显子3上(外显子3的50bp处)均发现了T/C碱基替换,产生了AA、AB和BB三种基因型,而朗德鹅此位点为野生型AA型,没有发生突变。3、朗德鹅外显子2上(外显子2的132bp处)发生了T/C碱基替换,导致产生AA、AB和BB三种基因型。三种基因型与产肝性能相关性不显著(P>0.05)。4、应用荧光定量PCR技术检测了SCD1基因在肝脏等12个组织的表达情况。SCD1基因在填肥组朗德鹅的肝脏和脂肪中的相对表达量较高达到1.0623和0.6448。其中,填肥组的肝脏、脂肪中SCD1基因的表达量是对照组的2倍。5、肝脏、脂肪、下丘脑和胸肌中SCDl基因表达量在填饲10d达到较高水平,填饲19d后表达有所降低。但总体而言,SCD1基因在填饲组的四个组织中表达量都增加。在对照组中,禁食24h后,四个组织中SCDl基因的表达量均急剧下降。
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