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本实验室前期工作发现,添加1.5%DMSO于重组CHO细胞的培养环境中使HBsAg的产量提高了80%以上,但同时造成了胞内HBsAg的大量积累,其含量是对照组的9倍以上。本论文利用免疫细胞化学技术分析了在DMSO作用下胞内HBsAg大量积累的部位,并具体分析了胞内HBsAg大量积累的主要原因。
利用免疫细胞化学技术和透射电镜技术分析了添加1.5%DMSO经换液培养2天后重组CHO细胞胞内HBsAg积累的部位。透射电子显微镜观察细胞样品后发现,经DMSO处理后的样品胞内出现很多的扩张区域,这些扩张区域分布整个胞浆,有的扩张区域已经侵蚀到细胞核上,而对照组未发现明显的扩张区域。利用胶体金标记技术分析后发现,经DMSO处理后的细胞胞内HBsAg主要分布在这些扩张区域中,对照组HBsAg主要分布在内质网或内质网衍生区域上。利用免疫荧光技术也观察到DMSO作用下HBsAg也存在于细胞核膜上,这是由于扩张区域侵蚀了细胞核的结果。
利用密度梯度离心技术对添加1.5%DMSO于细胞培养环境中引起胞内HBsAg大量积累的原因进行了研究和分析,发现造成胞内HBsAg大量积累的主要原因是在胞内“中间小室”中大量积累的HBsAg二聚体在1.5%DMSO作用下来不及组装成HBsAg颗粒或错误组装成颗粒多聚体,而成熟的颗粒是HBsAg有效分泌的前提。添加2 mmol/L的半胱氨酸于含有1.5%DMSO的细胞培养环境中能提高HBsAg表达量20%以上,这是由于半胱氨酸是HBsAg在胞内合成的重要原料,而不是由于改善了胞内HBsAg的积累.