背景和目的：单纯疱疹病毒性脑炎（herpes simplex encephalitis, HSE）是目前成年人中最常见的散发性、非流行性脑炎，死亡率和致残率极高。迄今HSE发病机理尚不明确。现有研究表明，感染初期神经元坏死是由于病毒直接溶解效应所致，尔后是细胞介导的免疫病理损伤。近十年来，一氧化氮（nitric oxide, NO）在免疫过程中的作用日益受重视。病毒感染时，机体免疫细胞合成的干扰素γ（Interferon γ, IFN-γ）能诱导炎性巨噬细胞、中性粒细胞等生成诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS），进而合成大量NO。NO存在于多种组织和器官，具有广泛的生物学功能。体内合成NO的关键限速酶是一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS），它有三种异构体。iNOS为Ⅱ型NOS，转录由细胞因子诱导，能催化持续大量的NO合成。NO在病原感染的过程中具有双重作用：一方面对机体具有保护效应，对抗多种细胞内细菌、寄生虫和病毒，另一方面，NO可能参与多种疾病的病理反应。迄今对HSE中NO作用的研究罕见。电子顺磁共振成像技术（EPR）已证实HSE大鼠脑内的NO升高，但随着RT-PCR、原位PCR的技术的发展，检测iNOS的表达似乎是研究NO更可靠的手段。目前尚未见HSE急性病程中iNOS表达与病情有无相<WP=6>关性及应用特异性iNOS抑制剂氨基胍（Aminoguanidin, AMG）是否对HSE有所影响的相关报道。因此，本实验拟建立稳定的Balb/c小鼠HSE模型，了解病程中iNOS表达的变化，观察给予AMG后HSE小鼠的临床表现及发病率变化，进一步探讨NO参与HSE的发病机制。方法：（1）40只Balb/c小鼠颅内或鼻内接种单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type ,HSV-1）F株104空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)（滴度为3.5×105PFU/ml），另20只Balb/c小鼠以生理盐水假性接种作为对照组，分析小鼠的临床表现和病理改变来确定何种HSE模型更稳定、更易观察。（2）60只Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组，实验组颅内接种HSV-1，对照组接种生理盐水。于接种后不同时间（2d，5d，7d，10d，14d）处死接种组和对照组小鼠，提取整个脑组织中的RNA，以人工合成iNOS的引物行RT-PCR来检测脑组织中iNOS表达的情况，同时以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GADP）作为内对照验证RNA的完整性和PCR操作过程。RT-PCR结果经1.2%琼脂糖电泳并于凝胶成像分析系统下进行半定量分析。（3）HSE小鼠给予iNOS特异性的抑制物氨基胍(aminoguanidine, AMG)，观察分析其临床表现及发病率，并与生理盐水治疗组和未治疗组进行比较。结果：（1）Balb/c小鼠颅内接种HSV-1所建立HSE模型，临床表现包括毛发紊乱、活动减少、精神萎靡、激惹、癫痫发作和死亡等。接种后第3天开始发病，6天开始有小鼠死亡，发病于7～10天达高峰，14天以后没有明显的临床表现。其发病率约为85%，未经治疗的<WP=7>死亡率约为25%，和对照组比较差异显著。病理检查可见脑膜和脑实质炎性浸润，脑组织变性坏死、胶质增生及血管周淋巴套等脑炎的典型改变。鼻内接种组仅1只小鼠出现毛发紊乱，光镜下见少量海马神经元空泡化，余小鼠临床和病理未见异常。假性接种组小鼠临床和病理检查未见异常。鼻内接种组和对照组之间无显著差异。（2）HSE组 Balb/c小鼠从第2天开始有iNOS表达，其后逐渐上升，于10天达高峰，在观察期内（2周）明显下降，接近基线。所有对照组均无iNOS表达。（3）HSE小鼠注射AMG后发病率降至40%，没有小鼠死亡，与未治疗组比较差异有显著性。而生理盐水治疗组死亡率和发病率与未治疗组比较差异没有显著性。结论：（1）颅内接种104PFU 的HSV-1 F株能建立稳定HSE模型，临床表现易于观察，病理检查可见病毒性脑炎的典型改变，能较好代表人HSE。（2）HSE的发生发展过程中存在iNOS的表达变化，与临床表现有一定的关联性，iNOS表达增加先于临床表现出现，疾病恢复期伴随iNOS的表达下降，提示NO可能参与HSE的发生发展。（3）使用iNOS特异性的抑制剂能有效地改善临床表现和疾病进程，降低HSE小鼠的发病率和死亡率，提示iNOS表达增加可加重HSE的病理损害，而抑制iNOS可能有助于HSE的治疗。