原发性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是临床上原发性肝癌（primaryliver cancer，PLC）的主要形式，居于全球恶性肿瘤的第五位；由于肝癌的高侵袭性、预后差以及缺乏早期诊断肝癌的高灵敏性和特异性的标志物等代表性原因，每年发病率和死亡人数逐步增长，已经位居肿瘤相关死亡的第三位[1]。虽然诊断HCC的方法有病理“金标准”，包括甲胎蛋白AFP在内的多个肿瘤标志物以及超声、影像学诊断等多种手段，但这些手段都有其一定的局限性[2]。肝癌的发生与发展是一个多分子参与的复杂生物学过程，由于参与这一过程的分子大多为糖蛋白，因此，研究蛋白糖基化作用以及糖链上糖蛋白的变化对于诠释肝癌的发生与发展有着非常重要的意义。目前已有大量研究表明蛋白糖基化在肝脏疾病的发生发展中起到很重要的影响[3]。唾液酸（Sialic acid）是九碳糖神经氨酸一族复合物的总称，通常位于糖蛋白和糖脂的糖基化非还原末端，广泛参与人体的许多生理病理过程[4]。本课题主要从三方面探讨蛋白唾液酸化修饰在原发性肝细胞癌中的临床意义。第一部分：血清唾液酸检测在肝胆胰肿瘤中的临床价值研究本研究主要基于临床大样本血清病例，检测血清唾液酸在正常健康人群、肝硬化患者以及原发性肝细胞癌患者中的变化，探讨血清唾液酸在原发性肝细胞癌中的临床意义。我们采用酶速率法分别检测血清唾液酸在建模组和验证组中的水平。在建模组的106例健康对照、97例肝硬化和223例HCC中，HCC患者的血清唾液酸明显高于健康对照人群和肝硬化患者，同时健康对照组高于肝硬化组水平。根据同期收集的临床病理资料将原发性肝细胞癌患者分层分析，发现随着肝癌TNM分期程度的加深，血清唾液酸水平也随之升高；血清唾液酸随着肿瘤大小的增加而升高；另外伴有门脉癌栓和血管癌栓的HCC患者血清唾液酸水平都明显高于无门脉癌栓和血管癌栓的HCC患者。将HCC组患者的临床实验室各项指标与其血清唾液酸做相关性分析，结果显示血清唾液酸与多个肝功能临床实验室指标呈相关性。应用ROC曲线评估血清唾液酸的诊断效力，结果发现在鉴别HCC和健康对照中，甲胎蛋白（AFP）仍然是临床诊断价值最高的指标，但在鉴别HCC和肝硬化中，血清唾液酸比AFP有更高的诊断价值。此外，我们应用logistics回归法建立了AFP和SA的参数联合诊断模型FormulaA和Formula B，在HCC和健康对照、HCC和肝硬化的诊断中明显提高了诊断效力，灵敏度和特异度大大提高。上述结果在验证组的513例健康对照、82例肝硬化和319例HCC中也得到了验证，血清唾液酸检测的统计结果与建模组结果大致统一。同时我们还研究了血清唾液酸在胆胰系统疾病中的变化。检测47例胆囊癌、71例胆管癌以及67例良性胆道疾病（29例胆道囊肿和38例胆结石）的血清唾液酸水平，结果发现胆囊癌、胆管癌组的血清唾液酸都明显高于健康对照组和良性胆道疾病组，良性胆道疾病与健康对照组之间没有显著性差异。与血清标志物CA199比较，分析血清唾液酸在胆道系统疾病之间的诊断价值。结果发现，在鉴别健康对照组与胆囊癌、胆管癌中，血清CA199仍然是灵敏度和特异度较高的临床诊断标志物，而在鉴别良性胆道疾病与胆囊癌中，我们运用logistics回归法建立了一个CA199和SA的参数联合诊断模型Formula E，其诊断效力明显高于SA和CA199的单个指标。另外，在114例胰腺癌以及27例疾病对照组胰腺炎中，检测结果显示胰腺癌的血清唾液酸水平明显高于健康对照组。结论：血清唾液酸的测定可以为临床肝硬化和原发性肝细胞癌提供有效的鉴别诊断价值，并能在HCC病情评估和监测中具有良好的应用前景。同时在胆胰系统肿瘤中，血清唾液酸有望成为其新的血清学诊断标志物。第二部分：原发性肝癌组织蛋白唾液酸化修饰的病理意义本部分采用凝集素印迹法分析检测了36对原发性肝癌患者的癌和癌旁组织的蛋白唾液酸化修饰水平，主要研究的是能特异性结合糖链末端唾液酸不同连接方式的两种凝集素：怀槐凝集素（Maackia amurensis lectin，MAL）和黑接骨木凝集素（Sambucus nigra lectin，SNA）。研究发现，以α-2,6-连接唾液酸的SNA凝集素在癌和癌旁之间有显著性差异，癌组织明显高于癌旁组织；以α-2,3-连接唾液酸的MAL凝集素在癌和癌旁组织之间没有显著性差异。结论：不同连接方式的唾液酸化在原发性肝癌组织中表达差异显著，从组织学水平揭示蛋白唾液酸化修饰与HCC的关系，为进一步研究唾液酸在原发性肝癌中的作用提供基础。第三部分：唾液酸转移酶对肝癌细胞生物学功能的影响本研究首先通过实时荧光定量RCR分别检测MHCC97-H、MHCC97-L、7721、Huh7、HepG2、Hep2.2.1.5、PVTT七株肝癌细胞系中唾液酸转移酶ST3GAL1、ST3GAL4和ST6GAL1的mRNA本底表达水平，以此为基础，构建ST3GAL1和ST6GAL1的过表达载体。通过对不同的肝癌细胞系转染唾液酸转移酶的过表达载体诱导基因高表达，阐明蛋白唾液酸化修饰的唾液酸转移酶在肝癌的发生发展和转移过程中的生物学意义。结论：唾液酸转移酶ST3GAL1可能参与肝癌细胞的增殖过程，唾液酸转移酶ST6GAL1能促进肝癌细胞的迁移运动。唾液酸转移酶对于原发性肝癌的进展和转移具有重要的生物学意义。综上所述，通过本课题的研究，我们发现蛋白唾液酸化修饰与HCC的发生发展密切相关；血清唾液酸对原发性肝细胞癌的鉴别诊断和动态监测有一定的临床价值，临床可用于弥补AFP的不足，特别适用于肝硬化和肝癌的鉴别诊断。唾液酸转移酶ST3GAL1、ST6GAL1可能有望成为未来靶向治疗的新靶点。