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水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus, RDV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus)的成员。RDV病毒粒子为直径约70nm的二十面体,基因组由十二条dsRNA组成,根据它们在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率,由慢到快,依次命名为S1到S12。RDV可以在它的宿主植物水稻和介体昆虫黑尾叶蝉(Nephotetix cincticps)和电光叶蝉(Recilia dorsalia)中繁殖,并由介体传播到宿主植物中。RDV编码七种结构蛋白和五种非结构蛋白。七种结构蛋白包括P1、P2、P3、P5、P7、P8、P9,分别由S1、S2、S3、S5、S7、S8、S9编码。五种非结构蛋白包括Pns4、Pns6、Pns10、Pns11、Pns12,由S4、S6、S10、S11、S12编码。用RT-PCR的方法从感病水稻叶片中克隆得到RDV S6,S7,S9和S12的基因片断,分别加上HA-tag和Flag-tag,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中,经测序分析确认无误后,电转化农杆菌后注射Nicotiana benthamiana叶片,3-4天取样,进行Western印迹分析,结果表明克隆到的基因均有表达,为进一步研究基因的功能奠定了基础。将RDV微核心蛋白基因S9克隆到酵母表达载体pGBKT7中,转入AH109酵母细胞,转化子可以在SD/ Trp-His- Ade-多营养缺陷固体培养基上正常生长,证明RDV P9在酵母中具有转录激活活性,运用β-半乳糖苷酶的活性分析对重组质粒转化子的转录激活活性进行定量分析,我们对检测数据分析发现与正对照(转化pGBK-GAD的Y187)相比,转化pGBK-S9的酵母菌中β-半乳糖苷酶活性可达到正对照的30%左右;与负对照相比pGBK-S9的酵母菌中β-半乳糖苷酶活性增强了200多倍,这说明P9蛋白激活了报告基因的表达。构建了含有gusA报告基因的植物表达载体用来分析P9在植物中的转录激活活性,实验结果表明,融合GAL4 DBD的P9蛋白可以在植物体内激活报告基因的表达,采用荧光分光光度法定量测定了三个效应基因第三天在叶片中激活GUS表达量的情况,融合GAL4 DBD的P9激活GUS强度明显高于负对照,可以达到正对照的40%以上, Western印迹法证明P9蛋白在酵母和植物中均可以表达。进一步证明在植物体内RDV P9蛋白同样能够激活基因的转录。为了检测RDV P9蛋白在细胞内的分布情况,我们构建了RDV P9与GFP的融合蛋白基因,并通过电转化的方法将含CaMV 35S启动子驱动下的融合基因的质粒转入到烟草BY2细胞中,使得融合基因在烟草BY2原生质体中表达,并在荧光显微镜下进行观察。我们的结果表明,RDV P9蛋白能够定位到细胞核中。研究结果表明RDV P9是该病毒的一个重要蛋白,它可能在病毒的侵染和复制过程中参与调控病毒或寄主基因的转录表达。