便携式血糖仪用于多目标DNA和α-淀粉酶检测的研究

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传统临床检验中许多目标物的检测通常转换为对双氧水(H2O2)或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)等少数几种物质的检测,需要大型的仪器设备、复杂繁琐的反应步骤和较高的实验成本。为了发展简便的、低成本的分析方法进行诊断和治疗,人们不断探究新的信号转换方式,开发低成本的便携式仪器设备用于临床检验及家庭自我监测。目前,有人将目标物的检测转换为对葡萄糖的检测,利用血糖仪实现了目标物的检测,为传统临床检验提供了一种新的手段。但是,现有的基于血糖仪构建的方法都只能检测单个目标物,且需要较长的检测时间,因此,本文以葡萄糖为信号转换分子,利用血糖仪发展了多目标DNA的检测及α-淀粉酶的快速定量检测。具体研究工作如下:1.利用便携式血糖仪和微流控芯片发展了一种多目标DNA同时检测的方法。首先构建了一个多通道微流控芯片,并在芯片不同侧通道中修饰乙型肝炎病毒(HBV)不同基因分型的捕获探针。在芯片主通道中注入样品溶液时,样品溶液可自动分到四个独立的侧通道中。当样品溶液中存在HBV DNA时,HBV DNA与侧通道中的捕获探针杂交,随后引入洗脱液将非完全互补的HBV DNA洗脱下来。之后加入蔗糖酶-DNA复合物,其与捕获探针、HBV DNA三者形成夹心式结构,从而将蔗糖酶固定在通道表面。加入蔗糖后,蔗糖酶催化蔗糖生成葡萄糖,利用血糖仪检测不同侧通道中葡萄糖的浓度,可将不同HBV分型的浓度与葡萄糖的浓度联系起来,从而实现多个目标DNA的同时检测。该方法简便、灵敏,对单个目标DNA的检测限达到10pmol/L。此外,该方法有望拓展到蛋白质,小分子等其它目标物的检测。2.利用便携式血糖仪,以葡萄糖为信号转换分子,通过一步混合反应后,建立了一种快速检测α-淀粉酶的新方法。该方法以麦芽戊糖为反应底物,以α-葡萄糖苷酶作为辅助酶,当α-淀粉酶存在时,α-淀粉酶催化麦芽戊糖水解为麦芽三糖和麦芽糖,随后生成的麦芽三糖和麦芽糖进一步被α-葡萄糖苷酶水解为葡萄糖。利用血糖仪检测生成的葡萄糖,可以实现对α-淀粉酶的快速定量检测。在优化后的条件下,本方法可以在15min内实现α-淀粉酶的检测,对于高浓度的α-淀粉酶(700U/L)而言,甚至可以在5min内产生明显的检测信号。本方法具有很好的选择性,能对血清和尿液中的α-淀粉酶进行测定,与传统方法相比,不需要大型昂贵的仪器和专业技术人员进行检测,设计新颖,操作方便,可用于即时检测。
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