用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从猪A组轮状病毒的总RNA中扩增了1172bp的VP6基因。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆质粒载体pMD-18-T中，转化至受体菌JM109中，通过质粒提取、酶切鉴定、PCR鉴定、序列测定，证明重组质粒pMD-18-T-VP6中含有轮状病毒VP6基因。经氨基酸序列分析，表明克隆了轮状病毒的主要保护性抗原VP6全基因的抗原表位区。 用限制性内切酶BamHI和KpnI将VP6基因从pMD-18T-VP6进行酶切；同样用BamHI和KpnI双酶切表达栽体pVAX1，将这2个双酶切产物回收、连接转化，通过质粒提取及酶切鉴定证明完成了pVAX1-VP6真核表达栽体的构建。将重组质粒应用脂质体法转染至MA-104细胞，利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。应用RT-PCR技术进行检测。结果显示，构建了VP6基因的真核表达质粒pVAX1-VP6，用其转染MA-104细胞后可检测到绿色荧光蛋白的表达，同样应用RT-PCR技术检测了pVAX1-VP6mRNA的表达情况。 将实验动物BABL/c小鼠随机分为A、B、C3组，A组肌肉注射真核表达载体pVAX1，B组肌肉注射重组质粒pVAX1-VP4+pVAX1-VP7；C组为三联免疫组，肌肉注射重组真核表达质粒pVAX1-VP6+pVAX1-VP4+pVAX1-VP7。每只鼠100μg/100μL，共免疫3次，每次间隔2周：首次免疫第0，14，28，42天眼球取血后无菌取脾，进行ELISA检测及脾脏淋巴细胞的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+细胞数量变化，同时进行淋巴细胞转化试验。