【摘 要】
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目的:泡球蚴源性外泌体对巨噬细胞的极化作用,并探索出促进巨噬细胞极化的最适浓度。方法:1.从感染泡球蚴的BALB/c小鼠病灶中泡球蚴原头节,进行体外培养,收集上清,分离获取上
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目的:泡球蚴源性外泌体对巨噬细胞的极化作用,并探索出促进巨噬细胞极化的最适浓度。方法:1.从感染泡球蚴的BALB/c小鼠病灶中泡球蚴原头节,进行体外培养,收集上清,分离获取上清中泡球蚴源性外泌体。2.巨噬细胞培养并诱导为成熟M1型巨噬细胞。3.设置不同的外泌体浓度分别与M1型巨噬细胞共同培养,4.检测M1和M2型巨噬细胞相关细胞因子及表面抗体,同时确定泡球蚴源性外泌体与巨噬细胞作用的最佳浓度。ELISA和流式细胞技术分别检测M1型巨噬细胞相关指标:IL-6、TGF-α及表面CD16/32分子表达水平,M2型巨噬细胞指标:IL-10水平;表面CD206和CD369分子表达水平,统计分析。结果:我们成功构建泡球蚴原头节感染BALB/c小鼠模型,并在感染小鼠病灶的病理组织切片中找到原头节,在培养原头节的上清中,透射电镜下观察到大小约100nm,多为圆形,形似杯样或茶托样的外泌体,表面特异性分子TSG101和CD9表达阳性,CD63为弱阳性。将不予外泌体刺激作为空白对照,不同浓度外泌体与巨噬细胞共培养72h,ELISA检测结果显示细胞因子TGF-α、IL-10和IL-6表达水平均有不同程度升高,差异有统计学意义(P<0.05),流式细胞技术检测结果表明细胞表面分子CD16/32、CD206和CD369均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);当浓度为10μg/ml时,M2/M1巨噬细胞相关细胞因子及细胞表型分子(IL-10)/(IL-6)、CD369/(CD16/32)和CD206/(CD16/32)的比值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),即M2型巨噬细胞占比明显升高。结论:泡球蚴源性外泌体可促进M1巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化,且最适浓度为10μg/ml。
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