目的对硫磷是一种有机磷杀虫剂和杀螨剂,可经消化道、呼吸道、皮肤和粘膜进入人体,通过抑制乙酰胆碱酯酶来破坏神经系统,导致头痛、抽搐、视力不佳、呕吐、呼吸困难等,最后可致休克。对硫磷在尿中的主要代谢产物为硫代磷酸二乙酯、磷酸二乙酯、对氧磷、对硫磷和对硝基酚,美国政府工业卫生学家会议(ACGIH)规定尿中对硝基酚作为对硫磷的代谢产物监测指标,其生物接触指数为0.5mg/g肌酐(0.6mg/L),我国暂未制定尿中对硝基酚的检测方法和生物接触限值。苯乙烯可用来生产丁苯橡胶、聚苯乙烯等,主要经呼吸道进入人体,主要表现为中枢神经系统抑制症状,对呼吸道有刺激作用,长期接触有时引起阻塞性肺部病变。苯乙烯在人体内的主要代谢产物为尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸,ACGIH规定苯乙烯的特异性代谢产物为尿中苯乙醇酸与苯乙醛酸之和,其生物接触指数(二者之和)为400mg/g肌酐(480mg/L),我国也规定其生物接触限值是苯乙醇酸与苯乙醛酸的浓度和为400mg/g肌酐(480mg/L),我国检测方法的检出限较高,无法对低暴露接触苯乙烯人群尿中苯乙醇酸、苯乙醛酸的浓度进行测定。本文旨在建立对硫磷类农药代谢产物尿中对硝基酚的分散液液微萃取-高效液相色谱法、苯乙烯代谢产物尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸的分散液液微萃取-高效液相色谱法,满足职业接触或低暴露对硫磷和苯乙烯人群尿中代谢产物的测定。方法(1)采用分散液液微萃取-高效液相色谱法对尿中对硝基酚、苯乙醇酸和苯乙醛酸进行测定,在自制离心管中依次加入尿样、萃取剂、分散剂和盐析剂,涡旋萃取后于离心机内离心,取出上层萃取液进行高效液相色谱仪检测。(2)通过单因素轮换实验,在测定尿中对硝基酚的实验中依次探讨待测物质波长、流动相种类与比例、萃取剂种类与用量、分散剂种类与用量、萃取时间、盐析量与pH对实验结果的影响;在测定尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸的的实验中对苯乙醇酸和苯乙醛酸的波长、流动相种类与比例的选择、萃取剂种类与用量的选择、分散剂种类与用量的选择、萃取时间对实验的影响、盐析量与盐酸用量对实验结果的影响等进行探讨,选取实验的最优条件。(3)通过线性范围和检出限、相对标准偏差和加标回收率等方法性能学指标,探讨方法建立的可行性,以及实验方法的精密度和准确度。(4)将建立的检测方法应用于人体尿样和动物代谢尿样的检测,验证方法的实用性,并对检测苯乙醇酸和苯乙醛酸的实验过程进行不确定度评定,从而判定实验结果的可靠性。结果(1)尿中对硝基酚的测定:选取液相色谱柱C18(100×4.6mm,5μm),流动相种类及比例为甲醇-20mmol/L乙酸铵水溶液(50/50,v/v),紫外检测器波长317nm作为高效液相色谱的条件。取4.0mL尿样,加入盐酸0.4mL,沸水浴1h,冷却后将样液置于试管中,加入正辛醇0.1mL,甲醇0.4mL,氯化钠0.32g,调节pH至6,涡旋4min后2500r/min下离心5min,取上层液体进行分析测定。对硝基酚在0.0～0.5mg/L浓度范围内与峰面积响应值呈良好的线性关系,标准曲线方程为Y=867300x-112.8,相关系数大于0.999,方法检出限为0.002mg/L,加标回收率为80.2%～104.8%,日内精密度范围为2.23%～5.12%,日间精密度范围为1.45%～4.17%。喂养SD大鼠含2.0mg/L对硫磷的水样,测得大鼠尿样中对硝基酚含量为0.131～0.144mg/L。(2)尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸的测定:选取液相色谱柱RD-C18(4.6×250mm,3μm),流动相种类与比例为甲醇-0.3%乙酸水(v/v:55/45),紫外检测波长225nm作为高效液相色谱的条件。取4.5mL混合标准系列于试管中,加入250μL的盐酸(1mol/L),100μL正辛醇,400μL乙醇以及45.0mg的氯化钠,涡旋4min后2500r/min下离心8min,取上层液体进行分析测定。苯乙醇酸在0～10.0mg/L浓度范围内的线性方程为Y=45274x-2044.1,相关系数大于0.999,方法检出限为9.9μg/L,加标回收率为86.1%～101.6%,日内精密度范围为1.07%～3.76%,日间精密度范围为1.24%～3.33%。对浓度为5.0 mg/L的苯乙醇酸示例样品进行不确定度评定,得到其扩展不确定度为0.298mg/L。苯乙醛酸在0.0～2.0mg/L浓度范围内的线性方程为Y=330743x-7364.1,相关系数大于0.999,方法检出限为2.6μg/L,加标回收率为88.8%～100.3%,日内精密度范围为1.02%～3.17%,日间精密度范围为1.59%～2.41%。对浓度为5.0 mg/L的苯乙醛酸示例样品进行不确定度评定,得到其扩展不确定度为0.0582mg/L。结论(1)构建了分散液液微萃取-高效液相色谱法测定尿中对硝基酚的检测方法,检出限低,使用的有机溶液量少,富集倍数高,易于操作,适用于职业接触对硫磷类农药人群尿中对硝基酚的测定。(2)建立了分散液液微萃取-高效液相色谱法测定尿中苯乙醛酸和苯乙醇酸的检测方法,检出限低,富集倍数高,灵敏度好,适用于职业接触苯乙烯人群尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸的测定。(3)两种方法均满足《职业人群生物监测方法总则》GBZ/T 295—2017标准的要求。(4)通过对实际样品和质控样的测定,验证了方法的可行性,具有实际应用价值,为我国建立尿中对硝基酚、尿中苯乙醛酸和苯乙醇酸的检测方法提供技术支持。