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动物实验研究发现,无论是在自发性高血压大鼠模型上还是在高盐诱导的继发性高血压大鼠模型上,亦或是两者结合的高血压大鼠模型上均发现淋巴管的结构和功能发生了变化。前期研究表明,淋巴管在失血性休克发生发展过程中发挥至关重要的作用。那么在高血压状态下,发生失血性休克过程中淋巴管的功能是否与正常血压时一致,亦或有其它变化?尚未见报道。同时,血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂已广泛应用于高血压的治疗,且可以减轻失血性休克过程中血管内皮的损伤,也参与了失血性休克后多器官损伤、血管低反应性的发生过程。那么,ACE在正常血压或高血压发生过程中是否与淋巴管功能的变化存在一定的关系,值得研究。为此,在建立两肾一夹(2K1C)高血压大鼠模型的基础上,本研究通过运用ACE抑制剂依那普利(Enalapril)作为干预因素,观察ACE在正常血压、高血压大鼠失血性休克后活体肠系膜淋巴管收缩性以及离体肠系膜淋巴管的收缩性及其对P物质(SP)反应性变化中的作用与表达的变化,从而揭示ACE在正常血压、高血压大鼠失血性休克后淋巴管功能变化中的作用及其差异性,为针对ACE,从调控淋巴管功能的角度改善正常血压、高血压患者失血性休克的预后提供实验依据。首先,本实验制备2K1C高血压大鼠模型:雄性健康Wistar大鼠,体重为200±10g,经过适应性饲养后,随机均分为假手术组(仅进行麻醉和肾动、静脉分离,sham)、高血压组(采用平行针灸针缩窄法进行左侧肾动脉夹闭,2K1C)、假手术+依那普利组(仅进行麻醉和肾动、静脉分离,并在术后4周给予依那普利10 mg/kg/d,溶于饮用水中喂食4周)、高血压+依那普利组(建立2K1C高血压大鼠模型后,在术后4周予以依那普利10 mg/kg/d,溶于饮用水中喂食4周)。结果发现,2K1C术后,大鼠收缩压显著高于Sham组;第4周后,Enalapril治疗在第6、7、8周均发挥了显著的降压作用。结果表明,2K1C高血压大鼠模型建立成功,且Enalapril具有明显的降压作用。在2K1C术后8周或相应时间点,分别将上述4组中的每一组大鼠均随机分为假手术组(执行与失血性休克模型完全相同的手术,但不放血)与失血性休克组(常规方法建立失血性休克模型,维持低血压40±2 mmHg,1.5 h后,将放出全血加等量林格氏液,进行液体复苏)。常规技术观察低血压1.5 h、液体复苏结束后3 h或相应时间点的活体肠系膜淋巴管的收缩性,以收缩频率(F)、淋巴管收缩性指数(Index I)、淋巴管总收缩分数(Index II)、淋巴管动力学指数(L.D-Index)三个指标来反应活体淋巴管的收缩功能。结果发现,在失血性休克持续低血压1.5 h液体复苏前及液体复苏后3 h,失血性休克显著降低正常血压和2K1C高血压大鼠的肠系膜淋巴管的收缩频率及收缩功能;2K1C高血压大鼠较正常血压大鼠肠系膜淋巴管的收缩频率及收缩功能更为低下;Enalapril治疗可以提高2K1C导致高血压引起淋巴管收缩功能;同时,Enalapril治疗可以抑制失血性休克引起大鼠肠系膜淋巴管收缩功能的降低。研究也显示,各组大鼠在失血性休克后期,淋巴管收缩功能均较休克前期显著下降。结果提示,失血性休克及2K1C高血压均可引起活体肠系膜淋巴管收缩性下降;而在高血压存在的情况下,发生失血性休克发生,淋巴管收缩性下降更为严重,Enalapril治疗可以改善这种情况。随后,在各组大鼠活体肠系膜淋巴管观察结束后(即相当于休克液体复苏结束后3 h)留取肠系膜淋巴管,制备离体肠系膜淋巴管环,应用微血管压力-直径测量系统,观察并记录离体肠系膜淋巴管舒张末期口径(EDD)、收缩末期口径(ESD)、收缩频率(CF)及最大被动舒张管径(PD);计算泵流分数(FPF)、紧张指数(TI)、收缩幅度(CA),评价离体淋巴管的收缩功能,进一步观察Enalapril在正常血压、高血压大鼠失血性休克后离体淋巴管收缩性变化中的作用。然后,从低浓度到高浓度依次加入梯度的SP应用液孵育,不同浓度的SP均孵育3 min,期间分别记录各组的ESD、EDD、CF、PD,计算FPF、TI、CA等指标,并计算SP作用前后的CF、FPF、TI、CA的差值△CF、△FPF、△TI、△CA,评价淋巴管反应性。结果发现,失血性休克可以降低正常血压大鼠离体淋巴管的收缩性及反应性;2K1C高血压大鼠离体肠系膜淋巴管的收缩性与反应性均显著低于正常血压大鼠,Enalapril治疗可以提高2K1C高血压引起离体淋巴管收缩性及反应性的降低;Enalapril治疗均可以改善因失血性休克引起正常血压大鼠、高血压大鼠离体肠系膜淋巴管的收缩性及反应性,但在高血压状态情况下,失血性休克发生时,离体淋巴管CF、FPF升高,而Enalapril治疗后可以改善这一现象。在留取淋巴管组织制备淋巴管环的同时,留取胸导管组织,常规方法制备组织切片,免疫组织化学染色方法检测ACE表达;留取腹主动脉血,ELISA方法检测血浆血管紧张素(Ang)II水平。结果显示,失血性休克引起正常血压大鼠淋巴管组织ACE表达和血浆Ang II水平增高;2K1C高血压大鼠ACE表达及血浆Ang II水平显著高于正常血压大鼠,Enalapril治疗可以降低2K1C高血压引起的这些变化;同时,Enalapril治疗均抑制了失血性休克引起正常血压大鼠、高血压大鼠ACE表达及血浆Ang II水平的升高。为了进一步观察肠系膜淋巴管收缩性变化是否与肠组织学损伤有关,本文留取肠组织,制备肠组织切片,HE染色观察肠组织形态结构变化,并测量了肠绒毛高度;同时,检测了肠组织干湿比、血浆D-乳酸(D-LA)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP),用以反映肠损伤程度。结果显示,失血性休克可以引起正常血压大鼠肠组织损伤;2K1C高血压大鼠存在一定的肠组织损伤,Enalapril治疗可以减轻2K1C高血压后的肠组织损伤;Enalapril治疗均可以改善失血性休克引起正常血压大鼠、高血压大鼠肠组织损伤。综上,失血性休克可以引起正常血压大鼠肠系膜淋巴管功能障碍,ACE抑制剂Enalapril可以改善失血性休克后的淋巴管功能;2K1C高血压大鼠淋巴管的收缩功能降低,2K1C高血压大鼠失血性休克后淋巴管功能障碍程度更为严重,Enalapril可以改善2K1C高血压大鼠的淋巴管功能;改善肠系膜淋巴管功能有助于减轻肠组织损伤,其机制有待进一步研究。研究结果提示,ACE在正常血压、2K1C高血压大鼠失血性休克引起淋巴管功能障碍的过程中发挥了一定作用;以ACE作为药物靶点,可进一步调控正常血压、高血压大鼠失血性休克后肠系膜淋巴管的收缩功能,对防治失血性休克引起的淋巴管功能障碍具有重要的意义。