类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthrits，RA）是以关节滑膜慢性炎症为主的全身性自身免疫性疾病。本病引起全身多关节肿胀、疼痛，晚期可致关节畸形，功能丧失。RA的发病在我国约为0.4%，是造成人群劳动力丧失及致残的主要疾病之一。自身免疫反应、滑膜组织的增生和炎症这3个病理生理过程在RA病程中相互作用、相互联系共同推动病情的进展，众多炎症细胞因子直接或间接参与关节的炎症反应及对滑膜、软骨的破坏，起主要作用的是TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子。核因子κB（NF-κB）是炎症和免疫反应居于中心地位的转录因子，它可以被多种细胞因子激活，如TGF-β、TNF-α、IL-1β、IL-6等，NF-κB进一步促进炎症反应中多种细胞因子的转录，NF-κB与细胞因子构成一反馈机制，导致类风湿关节炎炎症反应和关节破坏得以发生和发展。RA的基本病理特征是滑膜炎，并可引发包括骨和软骨的侵蚀、破坏以及系统性骨丢失的骨代谢变化。研究认为，NF-κB受体活化子配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）是前体破骨细胞分化、成熟的启动因子。RANKL与其受体RANK结合可促进IκB磷酸化而降解，导致NF-κB的活化，释放NF-κB p65。骨保护素（osteoprotegerin,OPG）是RANKL的假受体，可以竞争性阻断RANKL与受体RANK结合，抑制破骨细胞分化成熟，诱导破骨细胞凋亡。IL-6可诱导TNF-α和IL-1等其他细胞因子的产生和释放，并增强其炎症破坏作用，被认为是炎症反应中细胞因子生物效应的放大因子。IL-10能抑制促炎性细胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6等的产生，能抑制炎性细胞（如单核细胞、淋巴细胞等）的粘附、侵润。前期实验证实赤雹根总皂苷（Saponins of Thladiantha Dubia Roots，STDR）对多种疼痛模型的痛反应有显著的抑制作用，对角叉菜胶诱发的大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用。并初步证明，其可明显降低模型动物血清及炎症组织中PGE2、MDA、NO的水平。近年来，中药及其有效成分在RA治疗中的作用日趋受到重视。本研究以RA大鼠为炎症模型，观察STDR对大鼠RA的治疗作用，以NF-κB p65、OPG、RANKL、IL-6、IL-10表达水平为指标，评价STDR对OPG/RANKL/NF-κB通路的影响，探讨STDR治疗类风湿性关节炎的作用机制，为满药赤雹的进一步开发提供有价值的实验和理论依据。目的：以类风湿性关节炎模型大鼠为研究对象，以关节炎指数、肿胀度为指标评价STDR对RA的治疗活性。以NF-κB p65、OPG、RANKL、IL-6、IL-10表达水平为指标，探讨STDR对OPG/RANKL/NF-κB通路调控作用，阐述其治疗类风湿性关节炎的机制，为STDR临床应用及进一步研究开发提供可靠的实验依据。方法：1.RA模型制备与分组雄性SD大鼠80只，随机取10只做正常对照。其余70只，每只大鼠右后足跖皮下注射FCA0.1ml。致炎后第18天，计算关节炎指数AI值。AI值≥6为造模成功的标准。将造摸成功大鼠随机分为模型对照组，STDR低、中、高剂量组（40mg/kg，80mg/kg，160mg/kg），雷公藤多苷12mg/kg组，每组10只。给药容积为10ml/kg，连续给药21d，空白组和模型对照组ig等体积的蒸馏水。2.大鼠足跖肿胀度的测定于造模前、给药前（致炎后第18天）及给药后第5、9、13、17、21天，用游标卡尺测量大鼠左后足（致炎对侧足）足跖厚度，测量3次，计算以平均值。足肿胀度（%）=[测量时足跖厚度（cm）-造模前足跖厚度（cm）]/造模前足跖厚度（cm）。3.关节炎指数计算于致炎后第18天及给药第21天，采用关节炎分数评分法记录继发性关节炎病变严重程度，计算关节炎指数AI值。0级：无红肿，0分；1级：跖关稍肿，1分；2级：小趾关节及足跖关节肿胀，2分；3级：踝关节以下足爪肿胀，3分；4级：包括踝关节在内的全部关节肿胀，4分。AI值=非致炎3只肢体关节肿胀级之和（最高分分为12分）。4.足跖组织中各因子表达水平的检测4.1标本的采集于给药后第22天，3%戊巴比妥腹腔麻醉，腹主动脉取血，取足跖组织。4.2NF-κB p65蛋白的测定免疫组化和Western Blot法检测各组大鼠足跖组织中NF-κB p65蛋白表达。4.2.1免疫组化法：4%多聚甲醛固定组织，常规石蜡包埋；切片；脱蜡至水；抗原修复；滴加封闭液（A液）；滴加一抗；滴加C液；DAB显色；酒精梯度脱水；二甲苯透明；封片；照片采集；图像分析。4.2.2Wertern Blot法：提取组织总蛋白；BCA法测定蛋白浓度；SDS-PAGE电泳；蛋白质电转移至PVDF膜；检测目的蛋白；显影、定影；胶片处理。4.3RT-PCR法检测各组大鼠足跖组织中NF-κB p65、IL-6、IL-10mRNA的表达。以目的条带的光密度与β-actin条带光密度的比值，作为该基因mRNA表达的相对水平。提取组织总RNA；测定RNA纯度和浓度；甲醛变性琼脂糖凝胶电泳法检测总RNA完整性；逆转录；PCR扩增；PCR反应产物分析。4.4ELISA法检测各组大鼠血清中OPG、RANKL、IL-6、IL-10的含量。结果：1.STDR对RA大鼠关节肿胀度和关节炎指数的影响1.1对关节肿胀度的影响STDR160mg/kg组给药后第5－21天继发侧关节关节肿胀度显著低于模型组（P＜0.05或P＜0.01），且第21天关节肿胀度明显低于雷公藤皂苷组（P＜0.05）；STDR80mg/kg组给药后第9－21天关节肿胀度显著低于模型组（P＜0.05或P＜0.01），STDR40mg/kg组给药后第13－21天关节肿胀度及关节炎指数显著低于模型组（P＜0.05或P＜0.01）。1.2对关节指数的影响STDR治疗第21天，STDR低、中、高剂量组关节炎指数分别为6.00±0.40、5.10±0.18、4.20±032，均显著低于模型对照组7.20±0.32（P＜0.05或P＜0.01）。2.STDR对RA大鼠足跖组织中NF-κB p65蛋白表达的影响2.1在免疫组化法中， NF-κB p65阳性表达部位呈棕黄色或深棕色颗粒，正常对照组未见阳性染色区域，模型对照组NF-κB p65呈强阳性，STDR各剂量组NF-κB p65阳性表达率显著低于模型对照组（P＜0.05或P＜0.01）。2.2在Western Blot法中，结果以NF-κB p65条带与β-actin条带的灰度比值作为NF-κB p65蛋白的相对表达水平，模型对照组NF-κB p65蛋白的相对表达水平为0.676±0.048显著高于正常对照组0.177±0.002（P＜0.01）。STDR低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白的相对表达水平分别为0.445±0.038、0.181±0.015、0.0754±0.006，均显著低于模型对照组（P＜0.05或P＜0.01）。3STDR对RA大鼠足跖组织中NF-κB p65、IL-6、IL-10mRNA的表达的影响3.1对NF-κBp65mRNA表达水平的影响模型对照组NF-κBp65mNA的相对表达水平为0.615±0.013显著高于正常对照组0.096±0.010（P＜0.01），STDR低、中、高剂量组NF-κB p65mNA相对表达水平分别为0.405±0.048、0.164±0.017、0.063±0.009，均显著低于模型对照组（P＜0.01），且呈现一定的剂量依赖性。3.2对IL-6mRNA的表达的影响模型对照组IL-6mRNA的相对表达水平为0.706±0.074显著高于正常对照组0.144±0.021（P＜0.01），STDR低、中、高剂量组IL-6mNA相对表达水平分别为0.536±0.050、0.115±0.022、0.081±0.014，均显著低于模型对照组（P＜0.01），呈一定的剂量依赖关系。3.3对IL-10mRNA的表达的影响模型对照组IL-10mRNA的相对表达水平为0.153±0.022显著低于正常对照组0.295±0.034（P＜0.01），STDR低、中、高剂量组IL-10mNA相对表达水平分别为0.272±0.024、0.280±0.029、0.254±0.026，均显著高于模型对照组（P＜0.01）。4. STDR对血清中OPG、RANKL、IL-6、IL-10含量的影响4.1对血清中OPG、RANKL含量的影响STDR低、中、高剂量组大鼠血清RANKL水平分别为98.74±10.17pmol·L^-1、87.81±17.78pmol·L^-1、77.75±14.61pmol·L^-1，均显著低于模型组120.80±12.14pmol/L（P＜0.05或P＜0.01）；OPG水平分别为71.67±2.62pmol·L^-1、77.50±0.93pmol·L^-1、91.04±7.26pmol·L^-1，均显著高于模型组53.64±3.46pmol·L^-1（P＜0.05或P＜0.01）；STDR各剂量组OPG/RANKL比值分别为0.71±0.08、0.89±0.17、1.13±0.24，显著高于模型对照组0.43±0.06（P＜0.05或P＜0.01）。4.2对血清IL-6、IL-10含量影响模型对照组大鼠血清IL-6含量为1.58±0.04pg·L^-1，显著高于空白对照组0.75±0.02pg·L^-1（P＜0.01），STDR低、中、高剂量组大鼠血清IL-6含量分别为1.13±0.04pg·L^-1、0.95±0.04pg·L^-1、0.79±0.06pg·L^-1，均显著低于模型对照组（P＜0.01）；模型对照组大鼠血清IL-10含量为1.91±0.08ng·L^-1，显著低于空白对照组2.60±0.07ng·L^-1（P＜0.01），STDR低、中、高剂量组大鼠血清IL-10含量分别为2.92±0.15ng·L^-1、3.06±0.08ng·L^-1、3.08±0.07ng·L^-1，均显著高于模型对照组（P＜0.01）。结论：STDR对弗氏完全佐剂诱发的大鼠RA有明显治疗作用。其作用机制与，抑制NF-κB、RANKL和IL-6的表达，提高OPG、IL-10表达水平，调节OPG/RANKL/NF-κB信号途径，诱导炎性细胞因子网络趋于平衡有关。