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第一章 Lnk对胰岛素/IGF-I信号通路的调节
目的：研究Lnk对胰岛素或IGF1细胞信号通路的影响及其作用机制。
方法：(1)脂质体转染、G418筛选得到稳定转染Lnk WT(或和Lnk RE)质粒的TOV112D和OVCA420细胞株。(2)Western blot检测100ng/ml人重组IGF1或100 nM人重组胰岛素处理前和处理15分钟后的磷酸化和总AKT、ERK和4EBP1信号通路蛋白。(3)免疫共沉淀(CoIP)检测体外Lnk和IR是否结合。
结果：(1)LnkWT抑制的TOV112D和OVCA420中无Ins处理或Ins反应的P13K-AKT和MAPK-ERK信号通路。(2) Lnk下调IGF1反应的MAPK-ERK但却上调PI3K-AKT信号传导，所有状态的AKT、4EBP1和ERK总蛋白则没有明显变化。(3) Lnk和IR的结合实验显示，Lnk与IR在体外可以结合，但是程度中等。
结论：(1) Lnk可以抑制上皮性卵巢肿瘤细胞中PI3K-AKT和MAPK-ERK细胞信号传导。(2)Lnk可以负性调节胰岛素反应的PI3K-AKT和MAPK-ERK细胞信号传导，作为胰岛素信号通路的一个新抑制因子，可能在上皮性卵巢肿瘤以及其他胰岛素信号通路异常相关性疾病中起作用。(3)Lnk上调IGF1反应的PI3K-AKT通路而下调MAPK-ERK细胞信号，Lnk对上皮性卵巢肿瘤细胞中IGF1反应的PI3K与ERK1/2通路可能存在相互作用，Lnk对胰岛素和IGF1分别反应的细胞信号通路的作用存在差异。(4)Lnk与IR在体外中等结合。
第二章 Lnk在正常卵巢和卵巢肿瘤中的表达，以及对其增殖的影响和机制探讨
目的：检测Lnk在正常卵巢和上皮性卵巢肿瘤组织，以及人正常卵巢上皮和卵巢上皮性肿瘤细胞株中的表达；并研究Lnk对正常卵巢上皮和上皮性卵巢肿瘤细胞增殖的影响及其作用机制。
方法：(1)上皮性卵巢肿瘤和正常卵巢组织的石蜡切片标本各5例，免疫组化方法检测各标本中Lnk蛋白的表达。(2)采用real-time PCR法检测多个上皮性卵巢肿瘤以及正常卵巢上皮细胞株中Lnk mRNA的表达。(3) SRB法检测稳定转染LnkWT和/或LnkRE，EV的TOV112D、OVCA420和IOSE144细胞的增殖曲线。(4)双层软琼脂克隆形成试验检测转染了LNK质粒的上述细胞的克隆形成能力。
结果：(1)正常卵巢外皮质的各期卵泡中皆见Lnk蛋白的表达。在卵巢上皮性肿瘤中肿瘤组织和间质均有的很强的Lnk表达，较正常卵巢明显增多。(2)Lnk在各个细胞株中均有表达。卵巢上皮性肿瘤细胞株与人白血病细胞株中的表达无明显差异。正常卵巢上皮细胞株IOSE144和IOSE80的表达较K-562稍低。(3)SRB生长曲线和软琼脂克隆形成试验皆显示LnkWT抑制TOV112D、OVCA420和IOSE144细胞增殖，LnkRE与EV比较则无统计学差异。
结论：(1)Lnk在正常卵巢上皮中有较高表达，并可抑制正常卵巢上皮细胞的增值，提示Lnk可能参与在正常卵巢上皮增殖的调节。
(2) Lnk在上皮性卵巢肿瘤中的表达较正常卵巢升高，可抑制上皮性卵巢肿瘤细胞的增殖，其作用部位在SH2区域，提示Lnk可能在上皮性卵巢的形成发展中起作用。
第三章 LNK基因敲除小鼠和野生型小鼠卵巢的组织学比较
目的：比较Lnk基因敲除(Lnk-/-)小鼠与Lnk野生型(Lnk WT)小鼠的卵巢组织学变化，在体内实验进一步观察Lnk对卵巢发育的影响。
方法：收集6-8周大的野生型Lnk的C57B L/6小鼠和Lnk-/-129/Sv小鼠的双侧卵巢各3例，常规组织切片染色，观察其组织学变化。
结果：Lnk-/-与LnkWT小鼠的闭锁的卵泡明显减少。卵巢黄体中，Lnk-/-小鼠的血管较LnkWT小鼠的明显增多，充血，细胞稍肿胀。
结论：提示Lnk可促进卵泡闭锁，对卵泡的发育及卵巢激素的分泌可能有影响。
本研究主要结论
1.首次发现Lnk可以负性调节上皮性卵巢肿瘤细胞中胰岛素反应的PI3K-AKT和MAPK-ERK细胞信号传导。
2.发现Lnk可以下调上皮性卵巢肿瘤细胞中IGF1反应的MAPK-ERK，但却上调PI3K-AKT细胞信号通路，提示Lnk对IGF1反应的PI3K与ERK1/2通路可能存在相互作用；Lnk对胰岛素和IGF1分别反应的细胞信号通路的作用存在差异。
3.首次发现Lnk在人类正常卵巢中有较高表达，并可抑制正常卵巢上皮细胞的增殖，而且Lnk-/-小鼠中凋亡卵泡减少，卵巢黄体中血管增多，充血明显，提示Lnk可能参与在正常卵巢上皮增殖和卵泡发育的调节，对及卵巢激素的分泌也可能有影响。
4.首次发现Lnk在上皮性卵巢肿瘤中的表达较正常卵巢明显升高；而且Lnk可抑制上皮性卵巢肿瘤细胞中P13K-AKT和MAPK-ERK的信号传导通路以及细胞增殖，提示Lnk可能通过影响细胞信号通路，在上皮性卵巢肿瘤的发生发展中起作用。
5.Lnk抑制细胞增殖的作用位点在SH2区域。