【摘 要】
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该文首先采用刚果红染色从瑞氏木霉cDNA文库中分离得到一株具有CMCase活性阳性克隆,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ(EndoglucanaseⅢ,EGⅢ).然后
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该文首先采用刚果红染色从瑞氏木霉cDNA文库中分离得到一株具有CMCase活性阳性克隆,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ(EndoglucanaseⅢ,EGⅢ).然后利用PCR方法从瑞氏木霉cDNA文库中扩增出内切葡聚糖酶I(EndoglucanaseI,EGI)全长因因并克隆到酿酒酵母非整合型表达载体,pAJ401上,转化到酿酒酵母中表达出具有活性的EGI酶蛋白.检测了酿酒酵母蛋白质分泌系统组分SSO2和SEB1对EGⅢ分泌的影响.该文利用重组PCR技术将包含编码内切葡聚糖酶Ⅲ信号肽、纤维素结合结构域和链接区的基因片段与编码内切葡聚糖酶I催化结构域的基因片段重组为杂合酶基因,转入酿酒酵母中表达出活性蛋白.与其亲本相比,杂合酶对纤维素的吸附及降解能力都显著降低.建立了双层平板筛选由定向进化方法产生的瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ突变体文库的方法,根据水解圈在平板上形成的速度判断酶活高低.利用定向进化方法随机突变温纤维素酶瑞氏木霉EGⅢ的基因,得到了一株低温酶突变体w-3.DNA序列分析显示,w-3是天然EGⅢ删除C-末端25个连续的氨基酸残基后的截短了酶分子.
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