柑橘在果树生产中占有重要的地位,但其童期较长,达6-8年以上,严重阻碍了遗传育种的进展,如何缩短童期受到越来越多的关注。1976年在湖北宜昌发现可以在2年内开花的枳的变异种—早实枳,并且它与普通枳一年一次开花不同,在一年内可多次成花,这为柑橘育种的研究提供了良好的材料。本实验室在克隆早实枳成花关键基因FT时,得到2个不同的FT cDNA序列,命名为PtFT1和PtFT2,且又根据序列的差异人为设计了PtFT3及PtFT4。构建了4个PtFT类似基因以及PtFT DNA全长序列在内的5个超表达载体,在模式植物烟草中异位表达,以分析早实枳中FT类似基因的功能及其与结构之间的关系。同时将PtFT1在柑橘中超量表达,观察PtFT1超量表达对柑橘造成的影响和表型的变化,为进一步研究创造材料。主要结果如下：1.不同PtFT类似基因的结构分析,结果表明,PtFT DNA序列全长共包括4个外显子和3个内含子,PtFT1为早实枳的成熟cDNA序列,有534bp,包括4个外显子；在PtFT1扩增的同时,还扩增到另一个序列PtFT2,相比PtFT DNA全长仅缺少了第一个内含子,而相比PtFT1则保留了另外2个内含子；PtFT2在翻译时会在第二个内含子处提前终止,形成PtFT3,因此认为发挥基因功能的主要部位在前2个外显子。但有文献表明FT基因的第四个外显子也有重要作用,因此将PtFT3之后的冗余序列单独扩增,得到PtFT4。2.分别构建了35S::PtFT DNA、35S::PtFT1和35S::PtFT4的超表达载体,分别转化烟草,获得了转基因株系,并分别从DNA水平和转录水平进行了阳性检测,均证明外源基因已经整合到烟草的基因组中。3.转基因植株表型分析。对T2代的转基因烟草开花时间及开花时叶片数统计分析,发现35S::PtFT DNA,35S::PtFT1和35S::PtFT2相对于野生型烟草均有早花效果,可提早开花90-100天,在植株为5cm、叶片4-5片时开始有花苞形成,而野生型植株花苞形成需要130天、19片叶子。同时发现,上述转基因植株生长过程中有明显的分枝增多的现象。而35S::PtFT3和35S::PtFT4的转基因烟草在开花时间及形态上都与野生型烟草一致,没有特殊的表型。结果表明,PtFT基因的第一个内含子可能对基因的转录调控起一定作用,但不影响基因功能的发挥,但PtFT2中翻译提前终止的序列以及冗余序列都失去了基因应有的功能,说明基因外显子的完整性是保证基因功能发挥的前提。4.利用农杆菌介导的方法,通过抗生素的筛选作用,获得了普通枳35S::PtFT1转基因植株,分别通过特异引物PCR阳性检测和RT-PCR分析,证明该基因确实已经整合到普通枳的基因组中。但由于转基因植株尚在生芽培养基中培养或刚移栽到田间不久,表型有待进一步观察。5.优化伏令夏橙遗传转化体系。为了遗传转化技术更好地在柑橘中利用,分析了不同种类激素在不同浓度下对伏令夏橙转化体系的影响,结果证明适合伏令夏橙芽诱导的培养基为MT+1.0mg/L6-BA,根诱导的最适培养基1/2MT+3.0mg/L IBA。