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本文利用尚未见报道的3-对甲基苯基-5-(2-磺酸基苯基偶氮)若丹宁和3-对甲基苯基-5-(4-甲基-2-磺酸基苯基偶氮)若丹宁试剂,建立了共振瑞利散射和二级散射技术测定脱氧核糖核酸、牛血清白蛋白、硫酸新霉素以及金属铝离子的高灵敏度新方法。通过紫外、荧光、共振瑞利散射和二级散射等手段初步研究了若丹宁类试剂与生物大分子和药物分子间的相互作用机理。
本文的研究内容主要分为以下几个方面:
1.首次将若丹宁类试剂作为生物大分子脱氧核糖核酸和牛血清白蛋白的光谱探针,系统研究了在十二烷基磺酸钠微乳液环境中,探针与生物大分子相互作用的共振瑞利散射和二级散射光谱特征及其反应条件,建立了共振瑞利散射和二级散射法测定痕量核酸和蛋白质的新方法。通过研究磺酸基偶氮若丹宁探针与生物大分子的相互作用,发现探针主要以较弱的疏水作用力、氢键和范德华力与生物大分子结合。当加入十二烷基磺酸钠时,作用力类型发生转变,探针通过十二烷基磺酸钠的桥键作用以静电引力与生物大分子结合为三元离子缔合体系,引起体系光谱性质的显著改变。
2.首次将若丹宁类试剂应用于药物的共振瑞利散射和二级散射法中,系统研究了两种方法测定氨基糖苷类抗生素的实验条件,建立了具有较高灵敏度和较好选择性测定新霉素的新方法。
利用量子化学的RHF/3-21G*解析梯度方法,采用Gaussian-98程序对若丹宁、新霉素和十二烷基磺酸钠的基态电荷、偶极距和轨道占据能进行计算,对各物质问可能的作用情况进行了预测,并通过紫外光谱和离子强度实验证实了量子化学的预测结果-各物质之间主要以静电引力发生相互作用。
3.以二级散射为手段研究了3-对甲基苯基-5-(4-甲基-2-磺酸基苯基偶氮)若丹宁与金属铝离子的相互作用,在十六烷基三甲基溴化铵微乳液环境中,牛血清白蛋白的加入能够促使体系形成四元离子缔合体系,导致体系二级散射强度急剧增强,基于此建立了二级散射法测定金属铝离子的新方法。方法具有很高的灵敏度,检测限达5.51ng·mL-1。并应用于实际样品的测定,取得了满意效果。
4.对共振瑞利散射和二级散射法测定脱氧核糖核酸、牛血清白蛋白、硫酸新霉素的测定体系进行比较总结,初步探讨了共振瑞利散射和二级散射光谱之间的关系,提出了偶氮若丹宁类试剂与被测物质的可能作用机理,并探讨了体系光散射强度增强的原因,为若丹宁类衍生物的应用及生物大分子和药物的检测提供理论基础。