科技的进步,工业的发展给人们带来了极大的便利,也带来了前所未有的环境污染问题。近年来,沙丁胺醇、己烯雌酚、多氯联苯、双酚A、柠檬黄等小分子环境污染物被广泛使用,严重威胁着人们的健康,这已引起社会和公众的广泛关注。环境污染物的内暴露检测能够真实客观地反映个体污染物的暴露水平,避免个体差异的影响,是预防环境污染对人体危害的有效方法之一。但是特定环境污染物内暴露检测技术存在检测项目众多、样本前处理困难、生物样本中含量低、成本无法控制等技术瓶颈,使得检测项目难以推广。因此,基于人体内暴露的环境污染物的检测技术亟待研究。本研究的目的是建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法,使其能够适用于大批量环境污染物内暴露样本的检测。通过参考文献,本研究首先制备特定污染物(沙丁胺醇、己烯雌酚)的人工抗原,动物免疫获得多克隆抗体,进而建立一种灵敏度高、特异性强、操作简单、适于大批量样本检测的ELISA方法,对所建立的方法进行考察,并用所建立的方法对特定环境污染物(沙丁胺醇、己烯雌酚)人体内暴露进行了检测,为克服环境污染物内暴露检测的技术瓶颈问题奠定了一定的基础。1.己烯雌酚多克隆抗体的制备及其己烯雌酚人体内暴露检测方法的建立目的：制备特异性好、灵敏度高的己烯雌酚多克隆抗体,优化并建立己烯雌酚(DES)人体内暴露的检测方法。方法：采用溴乙酸乙酯法及EDC/sulfo-NHS方法合成已烯雌酚人工抗原,采用小剂量长周期的方式来免疫新西兰大白兔,建立并优化ELISA检测方法,并对ELISA方法进行考察。用所建立的ELISA方法对人体尿样进行大批量检测。结果：所制备的已烯雌酚多克隆抗体的IC50为7.67ng/ml,建立了间接ELISA检测人体尿样中已烯雌酚(DES)浓度的方法,最低检测限为0.634ng/ml,方法的回收率在85%～110%之间,变异系数CV <10%。本研究建立的方法成功测定了100例正常人尿样中已烯雌酚的含量,结论：本研究建立的方法最低检测限与已报道的污染物检测方法相当,可用于监控和测定已烯雌酚对人体的危害。2.沙丁胺醇多克隆抗体的制备及其同时检测沙丁胺醇及盐酸克伦特罗人体内暴露检测方法的建立目的：制备特异性好、灵敏度高的沙丁胺醇多克隆抗体,优化并建立同时检测沙丁胺醇及盐酸克伦特罗人体内暴露的方法。方法：采用小剂量长周期的方式来免疫新西兰大白兔,建立并优化ELISA检测方法,建立标准曲线,并对方法的精密度和回收率进行考察。结果：所制备的沙丁胺醇多克隆抗体的IC50为2.208ng/ml,建立了间接ELISA方法同时检测沙丁胺醇和盐酸克伦特罗浓度的方法,最低检测限为0.152ng/ml方法的回收率在85%～110%之间,变异系数CV<10%,另外由于所制备的沙丁胺醇多克隆抗体与克伦特罗有高达98.12%的交又率,可以同时用于沙丁胺醇以及盐酸克伦特罗的检测,本研究建立的方法成功检测了100例正常人尿样中沙丁胺醇及盐酸克伦特罗的含量,结论：本研究建立的方法最低检测限与已报道的污染物检测方法相当,可同时用于监控和测定沙丁胺醇及盐酸克伦特罗对人体的危害。综上所述：本研究对沙丁胺醇、已烯雌酚两种常见的环境污染物的人体内暴露的检测方法进行了探索,通过合成特定环境污染物的人工抗原,制备特定污染物的多克隆抗体,在此基础上建立了ELISA检测方法。另外本研究以人的尿液为分析样本,并对大量样本进行了检测,其高检出率也充分说明了研究环境污染内暴露检测方法的必要性,也进一步验证了所建立的检测方法是科学可行的。本研究以人体尿样为样本,对人体没有损害。本研究建立的方法可以在不降低检测准确度的情况下,有效地降低检测的工作量,可以快速、高效、低成本地检测大量样本,为将环境污染物的内暴露检测方法进一步推广到普通人群奠定了一定的基础。