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目的：
骨癌疼痛是癌症病人最常见的一种疼痛，严重影响癌症病人的生存与生活质量。蛇毒及其复方制剂用于镇痛已有数十年的历史，且具有镇痛作用强、持续时间长，无耐受性和成瘾性的优点。冰茶栓是以蝮蛇毒为主药的中药复方制剂，在作为医院制剂临床应用过程中发现该制剂具有显著的抗癌痛作用，且对阿片类药物耐受和成瘾的病人有明显的抑制作用。迄今国内由于缺乏成熟的癌症痛动物模型，相关研究受到严重限制，近几年国外相继有了成功建立骨癌痛模型的报道，但在国内由于受到细胞株来源的限制，癌痛模型问题仍然是癌痛研究及其药物评价的障碍。本研究旨在应用国内易得的瘤株建立大鼠骨癌疼痛模型，并应用该模型评价冰茶栓的抗骨癌痛作用，同时从整体、细胞、分子水平探讨其可能的作用机制。
方法：
W256细胞诱导大鼠骨癌疼痛模型及评价：将4 × 10<4>个W256癌细胞注入SD大鼠胫骨上段骨髓腔内，采用大鼠热板法和足跖压痛法分别测量热痛阈和机械痛阈的变化，观察痛觉过敏的形成；X线摄片进行放射学评估骨质破坏程度，同时，组织切片HE染色观察肿瘤生长和骨结构的破坏情况；
冰茶栓抗骨癌痛的药效评价与机制探讨：复制骨癌痛模型后，给予冰茶栓101mg/kg、50.5 mg/kg、25.25 mg/kg三个剂量治疗，同时设假手术组、模型组、罗通定组(16mg/kg)作为对照。以热板法和足跖压痛法分别测量热痛阈和机械痛阈值的变化，评估BCS镇痛效果；放射学评分观察BCS对骨损伤的影响；HE染色观察BCS对骨组织病理损伤的影响；放免法(RIA)检测血浆PGE<,2>的含量、酶免法(ELISA)检测血清TNF-α、IL-1β的含量，探讨BCS抗骨癌痛的外周机制；放免法检测皮层、丘脑、海马组织脑啡肽(L-EK)和内啡肽(β-EP)的含量，探讨BCS对中枢内源性阿片肽的调控作用；分别以免疫组化和RT-PCR检测星形胶质细胞GFAP蛋白及其mRNA的表达，观察BCS对脊髓星形胶质细胞的影响，探讨BCS抗癌痛作用的中枢机制。
冰茶栓对骨癌痛大鼠骨溶解的影响：实验动物随机分为 4 组：假手术组、模型组、邦罗力组(4μg/只)、冰茶栓组(101mg/kg)。除假手术组外，其余3组如法复制骨癌痛模型。通过放射学评分、骨组织HE染色评估BCS的抗骨溶解作用；通过TRAP染色观察骨组织破骨细胞数量，放免法(RIA)检测血浆PGE<,2>的含量，透射电镜观察骨组织的超微结构，免疫组化检测骨保护素OPG表达，以探讨BCS抗骨溶解的可能机制。冰茶栓含药血清对星形胶质细胞(AST)的影响：原代培养SD乳鼠大脑皮层AST，将纯化的细胞经免疫细胞化学鉴定后，随机分为BCS含药血清高剂量(202mg/kg)、中剂量(101mg/kg)、低剂量(50.5mg/kg)组和空白血清组，加入相应血清共培养48小时后，MTT比色法观察AST的增殖情况，流式细胞仪检测AST的凋亡率和细胞周期的变化。
结果：
造模动物第12天开始热痛阈和机械痛阈明显下降，出现热痛觉过敏和机械痛觉过敏，并呈渐进性发展；胫骨X线摄片显示14天即有明显的骨质损伤，第21天时出现病理性骨折；组织切片显示骨髓腔内肿瘤生长活跃，向外侵蚀破坏骨皮质。
BCS可显著提高骨癌痛大鼠热痛阈和机械痛阈值；明显改善肿瘤引起的骨损伤；降低模型大鼠外周血中PGE2、TNF-α、IL-1β的含量；上调丘脑组织L-EK和β-EP含量；下调脊髓星形胶质细胞GFAP蛋白及其mRNA的表达。
BCS对肿瘤诱导的骨溶解有明显改善作用；BCS可明显减少模型大鼠骨组织破骨细胞数量；降低模型大鼠血浆PGE<,2>含量；透射电镜观察可见BCS组破骨细胞呈凋亡形态学改变，成骨细胞呈活跃状态；BCS组骨组织骨保护素OPG表达明显上调。
MTT结果显示，冰茶栓高、中剂量组较空白血清组细胞数量明显减少，低剂量组与空白血清组比较无显著差异；流式细胞仪检测结果显示，冰茶栓组细胞凋亡比例较对照组明显增加； G<,0>/G<,1>期细胞比例较对照组明显提高，S 期和G<,2>/M期细胞比例较对照组明显降低。
结论：
应用Walker-256细胞可以成功建立大鼠骨癌疼痛模型；冰茶栓对Walker-256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠具有明显的镇痛作用和抗骨溶解作用；冰茶栓抗骨癌痛作用的机制可能是通过抑制星形胶质细胞激活介导的中枢敏化、降低肿瘤组织分泌PGE<,2>、TNF-α、IL-1β等细胞因子、调控中枢内源性阿片肽的含量、降低破骨细胞的数量和活性以抑制骨溶解的发生等多个途径实现的。