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苜蓿是牧草之王,是重要的蛋白饲草,培育苜蓿耐盐品种是开发利用盐碱地经济而有效的方法.该研究在完成耐盐苜蓿新材料第一代轮回选择的基础上,完成了耐盐苜蓿的第二代轮回选择及一次混合选择.在此基础上,以耐盐苜蓿×敏盐苜蓿组合的F<,2>群体为试验材料,利用改良BSA法筛选与苜蓿耐盐基因紧密连锁的分子标记,并用该标记鉴定苜蓿种质资源,旨在实现苜蓿耐盐育种和种质创新中亲本和杂交后代的分子标记的辅助选择.主要研究结果如下:1.以第一代轮回选择得到的后代群体为材料,在其种植的试验地上,又选出107个耐盐优株,并进行了耐盐性一般配合力的测定,花期淘汰低一般配合力植株,让耐盐性高一般配合力优株相互杂交,完成了耐盐苜蓿新材料第二代轮回选择.在完成两次轮回选择的基础上,又进行了一次混合选择,并得到了70个耐盐优株相互杂交的耐盐苜蓿新材料.2.建立了耐盐苜蓿与敏盐苜蓿相互杂交的F<,2>群体,通过盆栽条件下对F<,2>群体的苗期耐盐性鉴定,表明不同杂交组合,后代植株的耐盐性分离情况不同,该试验的四个杂交组合,遗传分析证明苜蓿的耐盐基因存在一个主效位点.3.以耐盐苜蓿和敏盐苜蓿为材料,应用RAPD技术,对26组520条随机引物进行筛选,结果表明:共有六十六条引物都可作为DNA多态性引物,为苜蓿耐盐性基因分子遗传标记的研究奠定了基础.4.以耐盐苜蓿与敏盐苜蓿相互杂交的F<,2>群体为试验材料,利用改良的BSA法和RAPD技术筛选出与苜蓿耐盐基因相连锁的分子遗传标记.在耐盐苜蓿DNA池、F<,2>耐盐苜蓿DNA中都扩增出一个约1400bp的DNA片段.经遗传分析证明,该标记与苜蓿的耐盐基因相连锁.这一结果在美国引进的耐盐苜蓿种质AZ-90NDC-ST、敏盐苜蓿种质AZ-88NDC和澳大利亚耐盐苜蓿品种Alfanafa中得到验证.5.苜蓿耐盐分子遗传标记PCR产物,用回收试剂盒回收纯化,然后将其直接与pMD 18-T载体连接,进行DNA序列测定,测定结果表明,该片段大小为1438bp.然后在Genebank进行了序列比对,结果发现,苜蓿耐盐分子遗传标记的核苷酸序列与截形苜蓿的mth2-6e18基因的一个片段(347bp)和mth2-33122基因的一个片段(334bp)序列分别有93％、91％的同源性.而mth2-6e18基因又是植物干旱、盐诱导CysPr1基因的标记基因,说明该片段与植物干旱、盐诱导的CysPr1基因高度相关.6.盆栽条件下,通过0.3％、0.4％ NaCl浓度的盐处理后的存活率、株高、干重共六个指标的聚类分析,将供试的75份苜蓿品种(种质)耐盐性分为三类,其中相对耐盐品种21份,中等耐盐品种34份,相对敏盐品种20份.在此基础上用已筛选出的苜蓿耐盐性分子标记进行重复鉴定,通过盆栽耐盐鉴定与分子标记鉴定比较证明,二者的鉴定结果具有较大程度的一致性.筛选出的耐盐苜蓿分子标记可以作为苜蓿耐盐鉴定的辅助指标.该研究的耐盐苜蓿新材料,为耐盐苜蓿新品种选育取得了阶段性成果;研究鉴定出的苜蓿耐盐性分子标记,为苜蓿种质耐盐鉴定、耐盐遗传育种提供了分子标记辅助选择标记,将会大大提高选择效率、缩短育种进程.