白菊木中二萜类化合物的抗炎活性研究

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二萜类化合物是含有四个异戊二烯单位的萜类化合物,共有20个碳原子,是一类结构复杂多样并具有重要生物活性的天然产物,广泛分布于高等植物、真菌、昆虫和海洋生物中。在高等植物中,二萜化合物主要发现存在于一些裸子植物和菊科、唇形科、大戟科、毛茛科、番荔枝科、姜科以及瑞香科等科属植物中。二萜化合物种类繁多,结构类型丰富,包括贝壳杉烷型、半日花烷型、克罗烷型、松香烷型以及海松烷型等,并且具有多种生物活性及其应用,现代药理活性研究表明:二萜化合物具有良好的解热抗炎、抗菌、抗病毒、抗心血管疾病和抗肿瘤、细胞毒作用、抗疟、抗氧化及酶抑制等活性。白菊木属(Gochnatia)是菊科(Composite)中罕见的两个木本植物属之一,白菊木(Gochnatia decora(Kurz)A.L.Cabrera)为其中之一,作为一种历史悠久的民间药物,主要分布于中国云南南部,用于治疗肺热咳嗽、哮喘、刀伤、枪伤等。课题组前期从白菊木树皮及枝叶中分离得到一系列对映-贝壳杉烷型二萜,并发现其中大部分具有抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7产生NO的作用。为进一步研究白菊木及这些化合物是否具有抗炎活性,本论文继续运用LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7模型,对从白菊木中分离得到的19个二萜类化合物进行了体外抗炎活性研究,经过细胞毒性实验、NO抑制实验、ELISA实验、Westren Blot实验,发现其中14个二萜类化合物可不同程度的抑制NO产生、降低炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17)表达,下调蛋白(COX-2、i NOS)的表达水平以及抑制NF-κB p65的磷酸化。以上结果提示我们白菊木中的二萜类化合物具有潜在的抗炎活性,为探究白菊木中的活性物质基础提供了科学依据。其次,通过LPS诱导的小鼠急性肺炎模型,对白菊木枝叶甲醇粗提物进行了体内抗炎活性研究。小鼠经连续一周灌胃白菊木枝叶甲醇粗提物后,以LPS感染48 h,收集肺组织,通过HE染色、肺湿干重比、ELISA等实验方法,观察各组小鼠肺组织的形态学变化以及炎症因子的含量,以此来评价白菊木枝叶甲醇粗提物对LPS诱导的小鼠急性肺炎的体内作用效果。结果发现:与模型组比较,白菊木枝叶甲醇粗提物能有效的改善急性肺炎小鼠的发病状态,降低肺组织中的炎症因子表达水平。民间药物用药历史悠久,疗效确切。从其传统功效出发,运用现代化学及药理学研究手段,阐明其药效物质基础及作用机制对民间药物的科学开发利用具有重要意义。本论文工作综合运用体内外炎症模型,评价了白菊木中二萜类单体化合物及其提取物的抗炎活性,为民间药物白菊木的药效物质及作用机制研究提供了前期基础。
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