论文部分内容阅读
腐败是造成食物浪费的主要因素之一,食物腐败是由其内外环境及微生物共同作用的结果,引起食物腐败的微生物类型很多。由于食物腐败引起了巨大的浪费,在古代,人们通过盐泽的方式来保藏食物。随着科技的发展,人类用来保藏食物的方法越来越多,如低温冷藏、添加防腐剂以及高温杀菌。其中在大部分即食食物中通过添加防腐剂来防腐,但是防腐剂是一种化学试剂,本身对人体有害。因此,近年来微生物学家开始尝试用微生物制剂来抑制食物的腐败,微生物制剂是某些微生物产生的一些代谢产物,能抑制腐败菌的生长,而自身对人体无害。要得到这些代谢产物,必须要筛选一株合适的菌株。本文是从腐败的泡椒凤爪中分离出来一株腐败菌Pseudomonas gessardii,并通过三亲结合将荧光蛋白GFP导入到该腐败菌中构建出一株工程菌PJ-9,以PJ-9作为被拮抗菌。以腌豆角、腌白菜、酸菜及泡椒风爪作为筛选材料,将四种材料的浸泡液经稀释分别在LB和MRS两种培养基上涂布。PJ-9菌经稀释后吸取适量的菌夜加入LB培养基中充分混合并倒平板。采用点种法,将四种材料培养出的菌用灭菌的牙签点种在混有PJ-9菌的LB平板上。根据是否产生抑菌圈共筛选得到16株,.其中从腌豆角中筛选出5株,腌白菜2株,酸菜6株,泡椒凤爪3株。通过进一步的复筛,然后根据抑菌圈的大小以及抑菌时间的长短,筛出一株拮抗菌作为研究的对象JK-3。扩增出JK-3的16s序列,并构建系统发育树,并通过生理生化实验确定为魏斯氏菌属,为G十,对PJ-9的平均抑菌半径为0.623cm。通过单因素试验对拮抗菌株Weissella sp. JK-3的发酵条件进行了优化,根据实验结果表明Weissella sp. JK-3的最佳培养基组合为：以1%蔗糖为碳源,以1%酵母膏为氮源,无机盐为0.05%磷酸氢二钾;Weissella sp. JK-3的最佳培养条件：在30℃下培养,装液量为100ml/250ml,培养时间为44h,初始pH为6.0,接种量为5%。