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第一部分mi R-630在结直肠癌组织中的表达特征目的:检测miR-630在结直肠癌组织和正常肠黏膜组织中表达水平差异,分析其与结直肠癌发病及病理上可能存在的关系。方法:选取45名结直肠癌患者术后标本中的肿瘤组织和同一肠段正常肠黏膜组织。分别提取两种类型组织的总RNA,然后逆转录成cDNA,再采用实时定量荧光PCR技术测miR-630的相对表达水平。利用SPSS17.0统计软件,采用配对T检验和卡方检验进行比较,检验取双侧,当P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:1、45例/对结直肠癌组及正常肠黏膜组织的表达量(n≥3)差异有显著统计学意义(P<0.001),miR-630在癌组织的表达水平高于其在正常组织中的表达水平。2、T3和T4的癌组织高于T1和T2(P=0.012);淋巴结转移阳性的患者高于淋巴结转移阴性的结直肠癌组织(P=0.002);对TNM分期的Ⅲ期和Ⅳ期的患者,癌组织内miR-630水平高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P=0.027)。结论:mi R-630在结直肠癌患者的肿瘤组织中的表达高于正常肠黏膜组织,提示mi R-630可能参与了结直肠癌的发生、发展过程。第二部分mi R-630在细胞株SW480中的作用及其相关机制研究目的:1、研究mi R-630对结直肠癌细胞株SW480增殖、迁移、侵袭性的影响,以此探讨mi R-630在结直肠癌发生发展中的作用。2、探索mi R-630和目的基因CDKN2B存在的调控关系,分析mi R-630的可能作用机制;3、探究其对活体成瘤性的影响。方法:1、通过慢病毒载体构建进行SW480细胞感染,筛选出稳定转染株。然后对转染Anti-mi R-630(mi R-630 inhibitor)后的细胞株和阴性对照(mi R-630 inhibitor negative control)细胞株进行mi RNA表达水平对比验证。2、对转染后的细胞进行细胞行为学方面实验,探究mi RNA表达抑制后的细胞增殖、克隆以及划痕、Transwell实验,对比Anti-mi R-630(mi R-630 inhibitor)及阴性对照载体(mi R-630 inhibitor negative control)在细胞增殖、克隆及侵袭性、迁移方面的差异。探讨mi R-630在结直肠癌细胞株中可能的作用。3、筛选出mi R-630潜在的靶基因,通过Western blot验证靶基因在inhibitor组和negative control(NC)两组细胞中的表达,肿瘤组织、正常组织中的表达。以确认mi R-630和靶基因CDKN2B存在的关系。4、将稳转株植入裸鼠皮下,观察mi R-630对活体成瘤的影响。应用SPSS17.0软件分析结果,两组资料间(n≥3)的差异应用两样本t检验,同样检验取双侧,当P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:1、稳定转染Anti-mi R-630细胞内表达mi R-630水平明显下降,低于NC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、转染了Anti-mi R-630的SW480细胞增殖克隆及迁移能力、侵袭性明显比NC组细胞低。3、CDKN2B蛋白在转染了Anti-mi R-630的SW480细胞株中显著提高。而在组织中,肿瘤组织中的CDKN2B蛋白表达水平显著降低。4、下调mi R-630表达的SW480细胞组肿瘤的重量及体积均小于对照组。结论:下调mi R-630的表达能抑制SW480细胞株的增殖、侵袭和迁移,另外加上裸鼠皮下肿瘤植入结果提示它可能与结直肠癌的发展、侵袭转移有关;mi R-630促进结直肠癌发生发展的一个机制可能是通过对靶基因CDKN2B负向调节实现。