PP242增强卵巢癌细胞株的化疗敏感性及其机制研究

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【目的】研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂III—PP242联合应用泰素对人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3的影响,并初步探讨其内在分子机制。【方法】不同浓度的泰素处理A2780和SKOV3细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测其凋亡情况;蛋白免疫印迹法分析mTOR抑制剂PP242处理A2780和SKOV3细胞后mTOR及其下游分子的表达情况;PP242联合泰素处理A2780和SKOV3细胞,流式细胞仪和Hoechst33342染色检测细胞凋亡;免疫荧光染色观察细胞浆微管结构的变化。【结果】随泰素浓度的升高和时间的延长,A2780和SKOV3细胞的凋亡率逐渐升高,但两种细胞在24h时随泰素浓度的升高而凋亡率变化不明显,SKOV3细胞在48h和72h时凋亡率变化不明显。PP242作用24h后A2780和SKOV3细胞的磷酸化mTOR、磷酸化S6K1及Survivin蛋白表达下降。PP242联合泰素处理细胞凋亡率明显增加,以48h作用最明显。Hoechst33342染色显示细胞核固缩、碎裂明显,免疫荧光染色示胞质内微管蛋白(tubulin)分布明显改变。【结论】mTOR抑制剂III—PP242通过下调p-mTOR、p-S6K1和Survivin蛋白可明显增强卵巢癌细胞株A2780和SKOV3泰素化疗的敏感性。【目的】通过检测信号转导和转录激活因子(STAT)3在卵巢癌顺铂敏感细胞株OV2008和配对的顺铂耐药细胞株C13K中的表达情况,研究Stat3小分子抑制剂Stattic对OV2008及C13K细胞顺铂治疗的影响,并探讨其分子机制。【方法】半定量RT-PCR检测OV2008和C13K细胞Stat3的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测磷酸化Stat3(p-Stat3)的蛋白表达水平。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测单用顺铂对细胞增殖的影响。流式细胞仪分析卵巢癌细胞株在Stat3抑制剂和(或)顺铂作用下的凋亡率及蛋白免疫印迹法检测p-Stat3、p-Akt和抗凋亡因子Bcl-XL的蛋白表达。【结果】与顺铂敏感细胞株OV2008相比,顺铂耐药细胞株C13K的Stat3mRNA和p-Stat3蛋白均过表达。小分子抑制剂Stattic可阻断Stat3的活化,导致顺铂诱导OV2008和C13K细胞的凋亡率明显增加。Stattic和顺铂联用后OV2008和C13K细胞p-Stat3、p-Akt和Bcl-XL表达明显下调。【结论】STAT3小分子抑制剂Stattic能有效增强顺铂耐药细胞株C13K对顺铂的敏感性,可能与Bcl-XL抗凋亡因子的下调有关。Stat3将成为治疗卵巢癌化疗耐药有前景的靶向分子。
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