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目的：获取并探讨改良内皮抑素(RGDRGD-ES)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用，摸索RGDRGD-ES对HUVEC细胞抑制作用的相对最佳作用浓度和时间；评估通过脂质体介导的结膜囊内注射改良的内皮抑素基因治疗兔眼角膜新生血管的疗效。 方法：通过快速定点诱变PCR方法获得含有RGDRGD膜序的改良人内皮抑素基因，构建其原核表达载体，表达、纯化改良内皮抑素(RGDRGD-ES)，检测RGDRGD-ES蛋白对人脐静脉内皮细胞的抑制作用。40只经过碱烧伤至角膜新生血管的新西兰大耳白兔随进分成四组，分别为PBS实验对照组，PCI空载体组，内皮抑素组，和改良的内皮抑素组。PCI空载体组，内皮抑素组，和改良的内皮抑素组每周两次每次分别注射5μg量。两只兔子四只眼睛即不接受碱烧伤也不接受治疗，作为绝对对照组。烧伤后7天和14天，测量角膜新生血管面积和房水中VEGF浓度：通过病理切面检测VEGF表达，通过免疫组化检测CD31表达。烧伤后90天，病理切片检测视网膜、肝和肾，免疫组化检测CD38炎性细胞表达。 结果：1.诱变了ES基因，获得了改良的RGDRGD-ES基因。2.成功构建原核表达载体，获得RGDRGD-ES蛋白。3.改良的RGDRGD-ES蛋白能够有效抑制人脐静脉内皮细胞的生长(P<0.01)；抑制率随着药物浓度(10μg/ml、20μg/ml、30μg/m1)的增加和作用时间(24h、48h、72h)的延长而逐渐增加，具有浓度和时间依赖性(P<0.01)。4.结膜下注射改良前后的内皮抑素基因均能明显抑制角膜新生血管的发生，改良后的内皮抑素抑制作用更强。5.房水中VEGF浓度在改良后的内皮抑素组明显低于其他各组。6.病理检测发现，改良前后的内皮抑素治疗组的兔眼角膜片中新生血管管道长度及新生血管面积均明显低于对照组和空载体组。肝，肾，视网膜组织切片均正常，无炎症细胞浸涧。 结论：成功构建了改良RGDRGD-ES基因的原核表达载体，其RGDRGD-ES蛋白在30μg/ml浓度作用72小时条件下能够有效抑制人脐静脉内皮细胞的生长，RGDRGD-ES蛋白对HUVEC的抑制作用较ES明显提高。改良前后的内皮抑素基因通过抑制VEGF表达，均能抑制兔眼角膜新生血管的发生。然而，改良后的含有RGDRGD膜序的内皮抑素基因具有更强的抗新生血管发生作用。