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辣椒（Capsium annuum）是农业生产上的大宗蔬菜之一，“六五”、“七五”、“八五”期间，我国把辣（甜）椒抗病新品种的选育作为重点攻关项目。为害辣椒地上部分的害虫有烟青虫，属于鳞翅目，主要以幼虫蛀食花、蕾、果，造成大量落果或烂果，使辣椒产量下降。苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis Berliner）杀虫晶体蛋白基因（Bt基因）中的一种cryIA（c）能编码133kD的晶体蛋白质，杀虫范围即为鳞翅目。因此，本实验通过农杆菌介导法用含有gusA基因和抗卡那霉素的nptⅡ基因的双元载体将cryIA（c）基因导入到辣椒外植体中，然后在含有卡那霉素的选择培养基上进行筛选培养，并经过检测，获得一批Bt转基因植株。选育出抗虫的转基因辣椒新品种，在生产上有着其积极的生态意义和经济意义。实验结果如下： 1．pKUC质粒转化两种根癌农杆菌 用直接导入法将双元载体pKUC质粒导入根癌农杆菌EHA105和LBA4404中经卡那霉素（Km）平板筛选阳性克隆，并用限制性酶切电泳检测，证明质粒已转进两种根癌农杆菌中。 2．高效植株再生体系的建立 经比较确定12—16天苗龄幼苗的子叶为再生能力较强的外植体，以MS为基本培养基，从设计的一系列培养基中按效果筛选出MS+6-BA5.0mg／L+IAA1.0mg／L为诱导芽分化的培养基，MS+6-BA3.0mg／L+IAA1.0mg／L+GA31.0mg／L为诱导芽伸长的培养基，1／2MS+IAA0.5mg／L为诱导生根的培养基。芽诱导频率最高达到83.3％，芽伸长培养基可以较好解决辣椒组织培养中芽茎不伸长的瓶颈问题，诱导生根率为78％。本实验基本上建立了高效辣椒植株再生体系，为更多外源目的基因的导入进行辣椒遗传性状的改良奠定基础。f＼硕士学位论文物一少M人引IR’ST门巳IS3．农杆菌介导的辣椒基因转化及影响转化的各因素分析 在利用根癌农朴菌介导法进行辣椒遗传转化的过私冲，设置了衣秆菌类型、辣椒基因型、外植体、Vir基因活化培养基、方法5个因素，研究分析这些因素对遗传转化效果的影响。结果显示，以获得Km抗性芽外植体频率为指标，可发现农杆菌菌株类型和辣椒基因型对转化效率都有较大影响，直接影响着转化效率；采用预培养2天的子叶外植体，用农杆菌侵染5一7分钟，可获得最高的转化效率。本实验对农杆菌转化条件进行了较为系统的比较研究，旨在建立一种转化效率高、稳定性好、通用性较强的辣椒农杆菌转化技术体系。4．对转基因植株的检测与鉴定 通过含一定浓度Km的选择培养基对辣椒外植体进行再生培养筛选，淘汰部分不具备xm抗性的白化外植体。对筛选出的再生植株通过组织化学染色法检测GUS 活性，结果在转基因植株的组织中检测到蓝色。PCR特异扩增和SOOthOOll点杂交的分子生物学检狈全果也证明外源目的基因 C吵 （L）f 合入了辣椒基因组中。对PCR的特异扩增产物进行＊＊A测序，结果证明转从因扔株基因组中存在的外源基因与 C叫 (C基因被扩增的部分有允全相同的碱基序列。本实验获得了一批转基因辣椒植株，这为后划在生产水平上选育抗虫转基因辣椒品种提供了基础。