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目的:阿尔兹海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种不可逆转性的中枢神经系统的退行性病变,可以引起智力的衰退并发展为渐进性的痴呆,同时伴随着神经病理学方面的损害,这种损害的病理表现在由大量的由39-42个氨基酸组成的淀粉样蛋白质多肽(AmyloidβPeptide,Aβ)在细胞外沉积所形成的老年斑(Senile plaques)。Aβ是由淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)在经过一系列的蛋白酶水解后所形成的产物,因此研究APP的表达和调控对诠释AD的发病机制有着重要的意义。本研究利用报导基因技术对转录因子Egr-1对APP基因的表达的调控作用进行了研究。方法:构建含有APP启动子的报导基因,并将其与Egr-1真核表达载体p CDNA3-Egr-1共转染到人恶性胶质母细胞瘤细胞(U87MG)与人胚肾上皮细胞(HEK293)中,以确定Egr-1对APP基因表达调控的作用。通过凝胶电泳迁移实验(Electrophoresis mobility shift assay,EMSA)和染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP’s assay)确定Egr-1蛋白在APP基因启动子上的结合部位,并且通过利用Egr-1抑制剂苏拉明(suramin)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)和丁酸盐(butyrate)来干扰内源性Egr-1的表达水平,从而观察Egr-1对APP基因表达的影响;通过Western blot检测Egr-1对APP蛋白表达的调控作用。结果:实验结果表明Egr-1对APP启动子有正调控作用。进一步的研究表明在APP启动子的5‘UTR区域,含有多个Egr-1结合位点,去除5’UTR区域的DNA结合序列,则Egr-1的正调控作用消失。Ch IP’Assay和EMSA实验结果进一步肯定了此区域的Egr-1的结合位点。Western Blot实验结果显示,Egr-1蛋白对APP的表达有上调作用;删除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用,通过苏拉明和组蛋白去乙酰化酶抑制剂干扰内源性Egr-1的表达则明显影响了Egr-1对APP基因表达的作用。结论:Egr-1是APP基因表达的正调控因子,这在AD的发病机制中是一个不可忽略的因素。