家蚕浓核病毒中国株是一种特异的、在我国发生的致使家蚕罹患类似浓核症的病原。它只感染家蚕中肠上皮组织的柱状细胞，其宿主感染后的病症与典型的家蚕浓核病毒(BaDNV-1伊那株)表现相似，病蚕软化，中肠的柱状细胞呈浓核症，但发病后期也感染杯状细胞。BmDNV-3拥有双分子基因组(VD1，VD2)，而且病毒自身编码DNA聚合酶。本试验室完成了对BmDNV-3全基因组序列的测定，但是对病毒复制方式、侵染机理及基因的功能不太清楚。本论文对家蚕浓核病毒(中国株)的NS3基因进行了克隆与分析，分别通过大肠杆菌BL21和家蚕杆状病毒表达系统对该基因做了表达。为分析NS3蛋白与DNA结合以及与其它蛋白互作，阐明非结构蛋白NS3在病毒复制中作用奠定基础。 1.根据BmDNV-NS3基因序列设计特异引物，PCR方法扩增到了一个669 bp的NS3基因，经酶切鉴定，NS3片段连接到了pGEM-T载体上。利用生物学软件对该基因的氨基酸序列特征和同源性分析，结果表明它与JcDNV、GmDNV、MIDNV的NS3蛋白同源性分别达31％、26％、26％，而且含有两个保守序列锌指结构，6个潜在的糖基化位点，4个潜在的磷酸化位点。 2.对家蚕五龄幼虫经口接种BmDNV-3病毒，分不同的时间段提取感染幼虫的中肠组织，提取组织中总RNA，反转录成cDNA。用RT-PCR对BmDNV-3 NS3基因进行半定量分析。结果表明NS3基因在2 h．p.i.开始转录，在36-72.h．p.i.时持续高水平转录，说明NS3蛋白在不仅在病毒基因组DNA复制期间大量表达，参与病毒基因组的复制，而且还可能参与病毒的装配。 3.NS3基因克隆到了大肠杆菌表达载体pET30a的Xho I和BamHI位点中，构建了pET30a-NS3重组载体，阳性质粒转化E.coli BL21，使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导NS3基因的表达，SDS-PAGE和Western Blotting显示，在30kDa处出现一条特异的蛋白带。质谱分析结果进一步表明表达的融合蛋白是BId)NV的NS3。表达产物经10％SDS-PAGE分离，切取目的条带，将透析获得的目标蛋白，皮下免疫新西兰大白兔，得到了NS3抗血清，SDS-PAGE显示经ProteinA亲和凝胶柱纯化的NS3抗血清效果较好。 4.将基因克隆到杆状病毒转座载体pFastBacHTe的Xho Ⅰ和BamHⅠ位点中，成功构建了pFastBacHTe-NS3重组转移载体。转化至受体菌DH10Bac后，PCR证明EGFP-NS3已成功发生转座。获得的重组Bacmid-EGFP-NS3转染家蚕细胞后，得到了重组病毒rBac-EGFP-NS3。rBac-EGFP-NS3接种五龄家蚕起蚕SDS-PAGE和western blotting分析表明NS3蛋白在家蚕幼虫中得到了表达。