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本实验以传统中药材雌性地鳖虫(Eupolyphaga sinensis Walker)为原料,采用浸提、盐析和DEAE-52纤维素离子层析等纯化方法,从其体内分离纯化得到纤溶活性蛋白(Fibrinolyric Protein of Eupolyphaga sinensis Walker,EFP),采用SDS-PAGE电泳法对其进行了分子量和纯度测定,SDS-PAGE结果显示其中有三种蛋白亚基,分子量为别为74.9KD,71.5KD,65.2KD,采用考马斯亮蓝法测得其中的蛋白含量为17.2%;采用纤维蛋白平板法测定EFP纤溶活性,测得其纤溶活性为20U/mg。
通过体内实验,构建荷瘤小鼠模型,药物实验分为阳性对照组(环磷酰胺),阴性对照组(生理盐水),药物高浓度组、中浓度组和低浓度组。实体瘤通过瘤重计算抑瘤率,腹水瘤通过细胞浓度计算抑瘤率。结果显示EFP对S180腹水瘤有较好的抑制率,药剂量为2.90mg/kg的抑制率为69.56%,明显高于环磷酰胺(20mg/kg)的51.75%的抑制率。EFP对S180实体瘤有较好抑制作用,药剂浓度为1.45g/kg时,抑制率为37.48%,高于环磷酰胺(20mg/kg)的35.59%的抑制率。并呈现一定的药物剂量依赖性。EFP对H22腹水瘤有较好的抑制率,药剂量为2.90mg/kg的抑制率为56.0%,和环磷酰胺(20mg/kg)的56.02%的抑制率相当。药剂浓度为0.73mg/kg时,对H22实体瘤抑瘤率为41%,高于环磷酰胺(20mg/kg)的37%的抑制率。通过VEGF含量检测可以看到,在S180荷瘤小鼠实验中,生理盐水组的荷瘤小鼠血清中VEGF含量为140.0 pg/ml,而药物组高浓度组荷瘤小鼠的VEGF含量仅为92.4 pg/ml。在H22荷瘤小鼠实验中,生理盐水组的荷瘤小鼠血清中VEGF含量为91.1 pg/ml,而药物组高浓度组荷瘤小鼠的VEGF含量仅为57.8 pg/ml,从上面的实验可以看到小鼠给药量和VEGF含量呈负相关。端粒酶活性的检测也可以看到,相对与生理盐水组,药物组的端粒酶活性都有所降低。
通过体外实验,不同浓度的EFP含药血清和EFP分别作用于H22,HeDG-2,MCF-7细胞株,于48h采用MTT法检测各组血清和EFP对肿瘤细胞株增殖的抑制率。结果表明,EFP含药血清组对H22,HepG-2,MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制作用呈一定的量效和时效关系,即随着含药血清浓度的增加,抑制率逐渐增加;而各组EFP对H22,HepG-2细胞的增殖则没有抑制作用,反而对其具有明显促进作用,说明EFP没有细胞毒性。