筛选调控莱茵衣藻IFT46基体定位的突变体及突变基因的功能研究

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真核生物的鞭毛/纤毛是突出于细胞表面的保守的亚细胞结构,纤毛结构和功能的异常会导致多囊肾、肥胖症等纤毛病。莱茵衣藻具有两根等长鞭毛/纤毛,是研究纤毛的模式生物。在莱茵衣藻、线虫和斑马鱼等模式生物中的研究证实,鞭毛的组装与维持需要IFT(Intraflagellar Transport)的参与,IFT是在鞭毛轴丝微管上的一种快速的双向运动过程。IFT复合物(IFT complex)由IFT-A(complexA)和IFT-B(complex B)组成。其中,蛋白IFT46是IFT-B的重要组成成分,对IFT-B的稳定性起着重要作用。IFT46不仅定位于鞭毛,而且定位于鞭毛基体处,它与其它IFT蛋白相互作用,组装成IFT复合物,运输货物至纤毛内。IFT46缺失突变体ift46-1,其IFT-B不稳定,突变体能形成极短的鞭毛,且其轴丝外动力臂缺失。但是IFT46定位于基体的机制,特别是影响IFT46等IFT复合体定位于基体的相关蛋白还不清楚。我们通过构建和筛选衣藻突变体文库,从87350个单克隆中,筛选到15株影响IFT46基体定位的突变体,通过RESDA-PCR方法确定了11株藻株的突变基因。其中突变体L1-78的突变基因为CrSEC14l,突变体L2-70的突变基因为CrNIT2。我们还构建了表达载体对突变株L1-78、L2-70进行功能回复以研究突变基因的功能。这些研究对于了解IFT46在基体定位的分子机制,IFT的组装、货物运输的机制具有重要的意义。
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