研究背景:活髓保存术是临床治疗牙髓疾病常用的技术手段。氢氧化钙作为盖髓剂的金标准广泛应用于临床。但是长期的随访记录显示远期效果并不理想。微渗漏，牙髓钙化，牙内吸收是造成治疗失败的常见原因。如何获得具有生物活性和诱导再生能力的盖髓材料是口腔工作者的目标。细胞外基质分子被证明能够分泌多种细胞生长所需的蛋白和活性因子，牙髓组织中被证明含有不同层次的未分化细胞群。利用牙本质细胞外基质分子诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞，可能是解决这一问题的思路。　　目的:　　1.体外培养牙髓细胞，为研究进一步实验和利用牙髓细胞提供基础。　　2.探索处理人牙本质基质的脱矿方法，观察以浸提方式获得脱矿牙本质中的细胞外基质分子对牙髓细胞体外分化的影响，为组织工程化牙髓牙本质复合体的研究提供新的线索。　　材料和方法:　　1.征得患者及家属同意后，按一定纳入标准收集临床因阻生或正畸治疗拔除的青少年恒牙。采用改良组织块法体外培养牙髓细胞(hDPCs)，倒置相差显微镜下观察细胞形态。收集第二代hDPCs，利用免疫荧光法鉴定细胞组织来源。收集生长稳定的第三代hDPCs绘制细胞生长曲线图。　　2.临床收集因正畸治疗拔除的健康完整第一前磨牙，利用高速涡轮手机，金刚砂车针和机用根管锉制备单一牙本质小体。通过超声清洗，梯度脱矿，灭菌等系列操作处理牙本质。将处理过的牙本质转入含双抗的基础培养基中孵育24小时，收集培养液即为脱矿牙本质(TDM)提取液，保存于4℃冰箱中备用。酶联免疫吸附剂测定TDM提取液中成牙相关蛋白COL-1、TGF-β1、DSPP及DMP-1的释放情况。　　3.设置实验组与对照组。实验组用TDM浸提液诱导培养hDPCs，对照组用普通DMEM培养基替代。CCK-8法比较两组细胞的增殖活性。采用real time PCR检测实验组与对照组hDPCs成牙相关蛋白OPN、OCN、BSP、DMP-1及DSP的表达情况。　　结果:　　1.共收集牙髓组织标本30个，长出原代6瓶，成功率为20％，传至第3代以上因污染断代3瓶。体外培养牙髓细胞3～4天可以观察到有细胞从组织块游出，10天左右可以爬满盖玻片。细胞大部分为长梭形成纤维细胞样形态，少部分呈多角形、星形。成涡轮状或束状排列。细胞免疫荧光结果显示hDPCs阳性表达间充质细胞标志Vimentin，阴性表达上皮细胞标志CK-14。细胞生长曲线约呈“S”形，从第3天进入指数生长。　　2.脱矿处理后的牙本质约为5mm（长）×2mm（宽）×1mm（厚）大小的柱状小体，表面形态光滑。利用酶联免疫吸附剂测定脱矿牙本质基质和普通牙本质基质释放COL-1，TGF-β1，DSPP及DMP-1能力，两组无统计学差异。　　3.利用TDM提取液诱导hDPCs，CCK-8检测结果显示诱导组hDPCs活性高于对照组。Real time PCR检测结果显示诱导组hDPCs成牙相关蛋白OPN、OCN、BSP、DSPP及DMP-1表达显著高于对照组。　　结论:　　1.改良组织块法培养人牙髓原代细胞简单易操作，并且成功率较高。　　2.梯度脱矿的方法能充分暴露的牙本质小管，有利于生物活性因子的释放。　　3.以浸提的方式能有效收集牙本质细胞外基质分子。脱矿牙本质基质提取液可以体外诱导牙髓细胞向成牙方向分化。