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目的
1、研究ALA-PDT在体外对宫颈癌细胞的生长抑制作用特点，以寻找对ALA-PDT最敏感的宫颈癌细胞株和影响细胞增殖的最佳作用参数。
2、探讨ALA-PDT对宫颈癌细胞的生长抑制机制，为深入探讨光动力作用杀伤宫颈癌细胞的生物学机制提供理论依据。
3、分析ALA-PDT对宫颈癌裸鼠移植瘤的体内疗效，对不同给药途径的PDT治疗效果比较，以寻找光毒反应最小的给药方式。
4、结合体外和体内实验，探讨ALA-PDT诱导宫颈癌细胞凋亡的作用途径。
方法
1、MTT法检测ALA-PDT对宫颈癌细胞增殖的影响，并筛选ALA-PDT对宫颈癌细胞增殖影响的最佳作用参数。
2、通过直接观察细胞形态、May-Grunwald Giemsa染色、Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞凋亡、Hoechst 33342荧光染色结合荧光显微镜观察ALA-PDT对宫颈癌细胞凋亡的影响、流式细胞仪分析ALA-PDT后细胞周期变化、Western blot检测ALA-PDT对宫颈癌细胞Survivin蛋白表达的影响、相对实时荧光定量PCR法检测ALA-PDT对宫颈癌细胞RNA的影响，以明确ALA-PDT对宫颈癌细胞的生长抑制机制。
3、选择对ALA-PDT最敏感人宫颈癌Me180细胞系建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型，通过人宫颈癌裸鼠移植瘤体内抑瘤实验、苏木精-伊红(HE)常规染色、免疫组化法检测ALA-PDT对宫颈癌肿瘤组织Survivin和VEGF蛋白表达的影响等方法，对局部给药和尾静脉给药两种给药方法进行比较研究。
4、相对实时荧光定量法检测ALA-PDT对宫颈癌肿瘤组织mRNA的影响，结合体外实验结果探讨ALA-PDT对宫颈癌细胞的生长抑制机制和作用途径。
结果
1、MTT结果表明，ALA-PDT在体外对宫颈癌细胞均有生长抑制作用，其中宫颈癌Me180细胞株是8种肿瘤细胞株中对ALA-PDT最敏感的细胞株，其IC<,50>为6-7×10<4> M。单独使用10 mM以下的ALA对宫颈癌细胞没有明显的毒性反应，10-30 J/cm<2>的激光剂量对宫颈癌细胞也没有明显的毒性。照射后4 h为ALA-PDT作用后的最佳时间。
2、Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测结果表明：ALA-PDT可以显著的诱导Me180细胞凋亡，作用后3 h的凋亡主要表现为早期凋亡，到24 h的时候，早期凋亡率降低，晚期凋亡率增高，总凋亡率降低，考虑为凋亡的时相问题。ALA-PDT作用后3h，1mM和2mM的ALA-PDT组的总凋亡率增高非常显著，高达．52.45％和77.92％。
3、直接观察细胞形态、May-Grunwald和Giemsa染色、Hoechst 33342荧光染色结合荧光显微镜均观察到细胞的凋亡现象。
4、周期分析结果表明，ALA-PDT作用后4 h，Me180细胞的周期分布无明显改变；ALA-PDT作用后24 h，宫颈癌细胞Me180的周期分布出现了明显的改变，1 nM～2 nM的ALA-PDT均有显著的G<,0>-G<,1>期阻滞的作用，S和G<,2>/M期明显减少。
5、相对实时荧光定量法检测不同组别的凋亡相关基因Survivin、P53、Bax、Bcl-2、Bad mRNA表达水平。证明PDT治疗后凋亡抑制基因Survivin和Bcl-2的mRNA的表达明显降低(P<0.001)，而促凋亡基因P53、Bax、Bcl-2、Bad mRNA表达水平稍有增高(P>0.05)。
6、Western blot检测结果表明，ALA-PDT可显著的抑制Me180细胞的Survivin蛋白表达，0.1 mM、1 mM、2 mM的抑制率分别为48.42％、71.22％、73.84％。
7、ALA-PDT对宫颈癌Me180细胞移植瘤生长的影响：治疗后瘤体早期出现发红、出血，24小时后肿瘤表面和切面出现局部坏死和变黑。静脉给药PDT组和局部给药PDT组的肿瘤体积与对照组相比明显减小，差异有显著意义(P<0.001)，其中局部给药PDT、组在7-14天时体积最小，且体积减小最明显。
8、HE常规染色可观察到：对照组、单纯静脉给药组、单纯局部给药组、单纯激光照射组无明显变化，而静脉给药PDT组和局部给药PDT组肿瘤受激光照射的皮下细胞区域坏死明显。
9、免疫组化蛋白检测结果表明，ALA-PDT可显著的抑制宫颈移植瘤组织的Survivin和VEGF的蛋白表达。
10、移植瘤组织mRNA的相对实时荧光定量结果证明PDT治疗后凋亡抑制基因Survivin和Bcl-2的mRNA的表达明显降低(P<0.001)，而促凋亡基因P53、Bax、Bcl-2、Bad mRNA表达水平稍有增高，但差异无统计学意义。与体外实验结果基本一致。
结论
1、ALA-PDT在体外对宫颈癌细胞有明显的生长抑制作用，在一定浓度范围内均呈现剂量-效应关系。宫颈癌Me180细胞株是8种肿瘤细胞株中对ALA-PDI最敏感的细胞株。
2、早期诱导宫颈癌细胞株Me180细胞发生凋亡是ALA-光动力抑制作用的重要机制之一。
3、线粒体依赖性途径在ALA-PDT诱导宫颈癌细胞株Me180细胞发生凋亡机制中起重要作用。
4、结合体内和体外实验，ALA-PDT对宫颈癌治疗是有效的。
5、临床用光动力治疗宫颈癌或癌前病变患者应尽量使用局部给药方式，以减少PDT光毒作用的危害和不便。