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稻曲病是由Ustilaginoidea virens(有性态:Villosiclava virens)引起的水稻穗部真菌性病害,在世界主要水稻种植区均有发生。近年来,随着水稻耕作制度的变化以及品种的更替,稻曲病的危害日益严重,已成为水稻主要病害之一。该病害不仅降低水稻产量,造成巨大经济损失,而且其产生的毒素,严重降低了水稻的品质,且有害人畜健康。目前,稻曲病的防治主要还是化学防治,因此,加强病原菌的监测、流行规律以及遗传多样性的研究,为病害的预报预测奠定基础,对科学指导该病害的化学防治具有十分重要的理论和实际意义。本研究建立了基于Real-time PCR技术的田间稻曲病菌孢子量的快速检测体系;初步监测了田间稻曲病菌孢子的动态,明确了稻曲菌孢子田间释放规律;同时采用ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)标记对安徽稻曲病菌进行了遗传多样性分析。主要研究结果如下:1.稻曲病菌孢子快速检测体系的建立采用Real-time PCR技术建立了稻曲病菌孢子量(y)和相应Ct值(x)关系的标准曲线:y=-0.2857x+10.403,(R2=0.9936,P<0.0001)。并对其进行合理性检验以及可靠性检验,结果表明,稻曲病菌不同类型无性孢子的标准曲线间无显著性差异,能够检测出稻曲病菌的厚垣孢子及分生孢子;技术重复的变异系数在0.61%~1.48%之间,生物学重复的变异系数1.8%,该体系重复性好。实时荧光定量PCR检测的孢子量和显微镜镜检的孢子量间存在极显著的正相关(R2=0.8966,P<0.0001)。2.稻曲病菌田间释放规律研究根据建立的Real-time PCR检测体系,监测了2014年7-9月安徽潜山稻作区(东经116.33°,北纬30.4°)的稻曲病菌田间孢子数量动态,结果表明,整个过程有两个释放高峰,分别于8月中旬和9月上旬。结合当地水稻生育期,8月中旬对应中稻孕穗期~扬花期,9月上旬对应中稻乳熟期,并且此时田间可见稻曲球。24小时监测结果表明,晴天多云天气,稻曲病菌孢子一天有两个释放高峰,分别在22:00~24:00和6:00~8:00。阴雨天,孢子的释放与降雨量有极显著的正相关。3.稻曲病菌遗传多样性分析采用ISSR技术,对采自安徽9个县(市)的49个稻曲病菌菌株进行了遗传多样性分析。从20条ISSR引物中筛选出11条扩增效果好的引物用于ISSR分析,11条ISSR引物共扩增出153条条带,其中116条多样性条带,多态性位点比例为75.8%。用NTSYSpc(Version 2.10e)软件对所有菌株进行UPGMA聚类分析及遗传相似度分析,结果表明,当遗传相似系数为0.735时,供试的49个菌株可以划分为4个类群,其中类群A为优势类群,同时也存在次要类群和特异性类群;来自同一地区的菌株遗传相似度高,亲缘关系较近;将聚类结果结合菌株地域来源,结果表明,来自江淮地区的的菌株均归为优势类群A,皖北地区的菌株单独归为一类;而来自皖南地区的菌株多样性较为丰富,且多为次要类群和特异性类群。用POPGENE(version1.3.1)软件对按地理区域划分的3个稻曲病菌群体进行遗传变异分析,这3个稻曲病菌群体遗传分化系数(Gst)均值为0.3328,且皖南地区的基因多样性最高(H=0.272),而皖北的最低,皖北地区的菌株与江淮地区的遗传距离最远;ISSR标记结果表明安徽稻曲病菌不同地理区域间存在一定的遗传分化,且其遗传类型与地理来源有一定的相关性。