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世界范围内抗生素使用量大幅增加导致水环境中检测出多种抗生素,严重危害人体健康和生态环境安全。本研究基于抗原抗体特异性免疫反应原理,结合课题组自主研发的平面波导免疫传感器,建立抗生素酶联免疫吸附检测方法及平面波导传感器检测方法,旨在为抗生素污染监控提供技术支撑。本研究首先采用碳二亚胺法,控制合适的反应条件,自主合成了性能良好的恩诺沙星完全抗原。恩诺沙星完全抗原的浓度为1.23 mg/mL,偶联比为1416,满足小分子物质完全抗原性能要求。在此基础上,以合成的恩诺沙星完全抗原免疫小鼠,成功制备了4株IgG型/κ链恩诺沙星单克隆细胞株,选择4株阳性细胞株中的2株进行腹水制备和抗体纯化,得到亲和常数分别为4.56×109 L/moL和2.22×1010 L/moL的恩诺沙星单克隆抗体。其次,本研究进行了抗原抗体免疫反应动力学研究,得出在一定范围内,适当降低抗体浓度能够提高方法灵敏度的结论。确定了四种喹诺酮类抗生素间接竞争ELISA方法的最佳包被抗原浓度及抗体浓度,建立了间接竞争ELISA免疫检测方法,采用自主合成的恩诺沙星完全抗原和单克隆抗体,恩诺沙星检测限为1.92μg/L;采用市售抗原抗体,恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星的检测限分别为0.95μg/L,5.59μg/L,0.66μg/L,13.31μg/L。再次,基于本课题组自主研制的平面波导传感器,将免疫检测技术和传感技术结合起来,探索了免疫芯片制作和抗体荧光标记方法,研究了抗体浓度、活化液种类、pH、硬度对平面波导免疫检测的影响,建立了恩诺沙星和诺氟沙星单物质平面波导免疫检测方法以及恩诺沙星、诺氟沙星同时检测的平面波导传感器方法。采用3种实际水样进行了恩诺沙星平面波导免疫检测加标实验,3种实际水样的回收率良好,均在100±20%以内。最后,本研究进行恩诺沙星酶联免疫检测技术标准化研究,确定了一步法间接竞争ELISA检测的特性指标,提出了包括适用范围、方法原理、试剂和材料、仪器和设备、样品处理、分析步骤、结果计算与表示、质量保证与质量控制、注意事项几个方面的恩诺沙星酶联免疫检测的标准化方案,为抗生素免疫检测方法标准的制定提供了依据。