Ca2+是普遍存在于植物中的一种第二信使,Ca2+信号在植物体的生长发育及感受外界环境信号中起到重要作用。冷冻、干旱、热激、盐等非生物胁迫下,植物体内的Ca2+浓度会发生变化,从而启动Ca2+信号转导途径。钙／钙调素依赖性蛋白激酶(Calcium/calmodulin dependent protein kinase, CCaMK)能感受Ca2+信号,是一种重要的Ca2+解码器。CCaMK含有一个激酶结构域、一个钙调素结合结构域,三个EF手型Ca2+结合结构域,其自磷酸化是Ca2+依赖性的,底物磷酸化活性是Ca2+和CaM依赖性的,属于Ser/Thr类蛋白激酶。许多研究表明CCaMK参与花的形成、光信号转导、豆科植物结瘤等植物的生长发育过程及植物对逆境胁迫的响应。我们最近的研究显示ZmCCaMK在ABA诱导的抗氧化防护过程中起重要作用,过氧化氢及干旱胁迫均诱导ZmCCaMK激酶活性上升,其在细胞质、细胞核、细胞膜上均有分布。但ZmCCaMK在ABA诱导的抗氧化防护过程中的作用机理却还不清楚,为进一步阐明ZmCCaMK的作用,本研究应用酵母双杂交技术筛选ZmCCaMK互作靶蛋白,并对靶蛋白与ZmCCaMK互作的真实性进行验证,具体内容如下：1.构建ZmCCaMK诱饵表达载体pEXP32-ZmCCaMK,并对ZmCCaMK的毒性、自激活情况进行检测,应用酵母双杂交从玉米cDNA文库中筛选其互作蛋白。结果筛选得到ZmCCaMK的两个拟互作蛋白WRKY62及NAM like protein (ZmZmNLP)。2.应用GST-pull down技术、免疫共沉淀技术进一步验证ZmCCaMK与ZmZmNLP互作的真实性。结果表明ZmCCaMK与ZmZmNLP在体外、体内均存在互作。3.从玉米cDNA中扩得ZmZmNLP全长序列,并将其构建到原生质体瞬时表达载体pXZP008上,以pXZP008-ZmZmNLP转化玉米原生质体,激光共聚焦显微镜观察ZmNLP亚细胞定位。结果表明ZmNLP定位于细胞核。