【摘 要】
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在室内人工的滞育诱导条件下,从卵期开始诱导烟夜蛾滞育.以蜕皮次数为标准对烟夜蛾的幼虫进行龄次划分.取不同龄次烟夜蛾幼虫及滞育蛹的头胸部提取总RNA,以其为模板合成第一
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在室内人工的滞育诱导条件下,从卵期开始诱导烟夜蛾滞育.以蜕皮次数为标准对烟夜蛾的幼虫进行龄次划分.取不同龄次烟夜蛾幼虫及滞育蛹的头胸部提取总RNA,以其为模板合成第一链cDNA.为了取得较好的实验结果,依照Genebank(AY052417)上发表的烟夜蛾滞育激素基因(diapause hormone,DH)的全序列设计两对引物,进行巢式PCR扩增,从转录水平上对DH基因的表达进行研究.以第一链cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,PCR产物纯化后,以之为模板进行第二轮扩增.结果表明,滞育激素基因在滞育诱导条件下的三龄、四龄、五龄、六龄幼虫及滞蛹中表达.而在一龄和二龄幼虫中不表达.采取同样的方法对解除滞育的蛹和成虫进行研究,RT-PCR结果显示,滞育激素基因在解除滞育蛹的中表达,但不在解除滞育羽化的成虫中表达.该实验首次对蛹滞育DH基因的时空表达进行研究,结果表明烟夜蛾DH基因的表达不仅具有发育阶段的时序性.而且具有表达部位的空间特异性.
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