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细菌对抗菌物质的抗药性是抗菌物质的应用与开发过程中一个不可忽视的问题。随着工业杀菌剂的广泛应用,细菌对工业杀菌剂的抗药性问题日益成为业内关注的焦点。本研究选取了常见的条件致病菌铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)对一种高效的异噻唑啉酮类杀菌剂(2-methyl-4-isothiazolin-3-one/5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one,MI/CMI;商品名卡松)的抗药性问题作为研究课题,试图揭示其抗药性的分子机制;其中重点在于探索P.aeruginosa对CMI/MI的抗药性是否与其抗氧化系统--oxyR调节子基因表达水平之间存在相关性。
本研究通过利用一定浓度的过氧化氢(H2O2)诱导处理P.aeruginosaATCC9027(本研究使用的P.aeruginosa标准菌株),并利用实时荧光定量PCR技术证实该处理提高了oxyR调节子基因表达水平;通过测定了质量分数1.5%的MI/CMI溶液对P.aeruginosa标准菌株及H2O2处理后的P.aeruginosa标准菌株的最低抑菌浓度(MinimumInhibition Concentration,MIC),发现oxyR调节子基因表达水平的提高并没有显著的影响P.aeruginosa对CMI/MI的敏感性水平。接下来通过使用浓度递增的CMI/MI对P.aeruginosa标准菌株进行连续诱导培养获得了P.aeruginosa的CMI/MI抗药性菌株,随后进行的实时荧光定量PCR实验表明P.aeruginosa的CMI/MI抗药性菌株oxyR调节子基因表达水平并没有发生明显的变化。本研究同时还使用了浓度递增的H2O2对P.aeruginosa标准菌株进行连续诱导培养获得了P.aeruginosa的H2O2抗药性菌株;结合MIC测定实验发现P.aeruginosa在H2O2以及CMI/MI间不存在交叉抗药性。最后本研究测定了CMI/MI对P.aeruginosa标准菌株及其CMI/MI抗药性菌株在不同温度下的MIC值,发现P.aeruginosa的CMI/MI抗药性菌株在30℃时对CMI/MI的抗药性水平比在37℃时更高,对于P.aeruginosa标准菌株这一差别则并不显著。
本研究结果表明P.aeruginosa对异噻唑啉酮类杀菌剂CMI/MI的抗药性不受其抗氧化系统--oxyR调节子基因表达水平的影响:同时温度有可能以某种未知的方式参与了P.aeruginosa对CMI/MI的抗药性机制。